Les kits de nettoyage d’ARN NucleoSpin™ sont recommandés pour le nettoyage de l’ARN total issu de préparations d’ARN contenant des quantités non admissibles d’inhibiteurs de RT-PCR*, souvent présents notamment dans l’ARN préparé avec des méthodes à base de phénol-chloroforme. Il est également recommandé pour l’isolement de l’ARN à partir de petites quantités de cellules de culture lorsque la co-purification de certains ADN génomique est admissible. Pour l’isolement de l’ARN de cellules et de tissus présentant une contamination minimale par l’ADN de l’ARN isolé, nous recommandons les kits ARN NucleoSpin™ contenant de la Dnase I (se référer aux informations de commande). Les kits permettent la purification d’ARN pur présentant un ratio A
260/280 dépassant généralement 1,9 (mesuré en tampon TE (pH 7,5)). Les kits de nettoyage d’ARN NucleoSpin™ sont également recommandés pour le nettoyage de l’ARN issu de réactions enzymatiques : transcription d’ARN in vitro, réactions d’amplification (ex. : kit d’amplification Amino-Allyl-mRNA ExpressArt™, artus GmbH, Hambourg, Allemagne), ARN biotinylé ou ARN marqué fluorescent (colorant Cy). L’ARN purifié est prêt à être utilisé pour des applications telles que les réactions enzymatiques de marquage (ex. : incorporation de colorant), la transcriptase inverse PCR (RT-PCR) et pour des hybridations de puces à base d’ADN/ARN (ex. : MWG rat microarray, MWG, Ebersberg, Allemagne ou Human Genome U133A Array, Affymetrix, USA). L’intégrité de l’ARN purifié, isolé à l’origine à partir de cellules eucaryotes, est examinée par électrophorèse sur gel d’agarose dénaturante : les bandes d’ARNr sont nettes, la bande 28S étant environ deux fois plus intense que la bande S18.
- Technologie à membrane de silice
- Récupération type : 85 % à 95 %
- Échantillon : ≤ 200 μl d’extrait phénol/chloroforme ou de mélange de réaction
- Volume d’élution : 40°μl à 100°μl
- Taille des fragments : > 200 b
- Capacité de liaison : 200 μg
- Temps de préparation : 20 min/6 préparations
- Format : mini colonne de centrifugation
- ARN pour RT-PCR, transfert Northern, dosages de protection RNase, extension d’amorce et technologie matricielle Pour le nettoyage d’ARN pré-purifié (ex. : Trizol) ; Mélanges de réaction ; ARN à partir de faibles nombres de cellules ; Amino-Allyl-mRNA ; ARN biotinylé.
