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Clonez efficacement les produits de PCR générés avec n’importe quelle ADN polymérase thermostable à l’aide du kit de clonage PCR Thermo Scientific™ CloneJET™, un système doté d’une sélection positive.
Le kit de clonage par PCR CloneJET est un système perfectionné de sélection positive pour un clonage extrêmement efficace des produits de la PCR générés avec tout ADN polymérase thermostable. Tout autre fragment d’ADN à extrémités franches ou adhérentes peut être cloné. Il est idéal pour les fragments d’ADN phosphorylés ou non phosphorylés. La ligature dans le vecteur de sélection positive inclus ne prend que 5 minutes, et son rendement est de plus de 99 % de clones recombinants. Les produits PCR à extrémités franches générés avec une enzyme corrective sont ligaturés directement dans le vecteur de clonage.
Les produits PCR générés soit avec des ADN polymérases sans activité corrective soit avec des mélanges d’ADN polymérases sont débarrassés des extrémités avant la ligature en 5 minutes grâce à l’enzyme de coupe franche d’ADN, thermostable, fournie avec le kit. Toutes les souches de laboratoire courantes à base d’E. coli peuvent être transformées directement avec le produit de ligature.
De plus, tout autre fragment d’ADN aux extrémités tronquées ou cohésives peut être cloné. Ce kit convient parfaitement aux fragments d’ADN phosphorylés ou non phosphorylés. La ligature dans le vecteur à sélection positive inclus ne prend que 5 minutes et permet d’obtenir plus de 99 % de clones recombinants. Les produits issus de la PCR aux extrémités tronquées générés avec une enzyme de correction (par exemple, la polymérase Pfu) sont ligaturés directement dans le vecteur de clonage. Les produits issus de la PCR générés soit avec des ADN polymérases non correctrices (par exemple, la polymérase Taq) ou des mélanges d’ADN polymérases, sont tronqués avant la ligature en 5 minutes grâce à l’enzyme de troncature d’ADN thermostable fourni avec le kit. Toutes les souches de laboratoire courantes à base d’E. coli peuvent être transformées directement avec le produit de ligature.Ce kit contient un nouveau vecteur de clonage à sélection positive prêt à l’emploi : pJET1,2 / blunt. Le vecteur contient un gène d’enzyme de restriction létale qui est perturbé par ligature d’un insert d’ADN dans le site de clonage. Résultat : seules les cellules bactériennes avec plasmides recombinants sont capables de former des colonies. Les molécules du vecteur pJET1,2 / blunt recircularisées expriment une enzyme de restriction létale qui éliminera la cellule E. coli hôte après transformation. Cette sélection positive accélère de façon radicale le processus d’analyse des colonies et élimine les coûts supplémentaires liés à la sélection bleu / blanc. Pour plus de commodité pour la cartographie et la manipulation de l’insert, le site de clonage multiple du vecteur de clonage pJET1,2 / blunt contient deux séquences de reconnaissance BglII à côté du site d’insertion. En outre, le vecteur contient un promoteur T7 pour la transcription in vitro et in vivo ainsi que pour le séquençage de l’insert.
Recommandées dans les cas suivants :
Clonage de produits issus de la PCR à extrémités franches ou à queue 3’-dA jusqu’à 10 kb ; Clonage de fragments d’ADN générés par des enzymes de restriction ; Séquençage d’ADN cloné ; Transcription In vitro et in vivo d’inserts clonés du promoteur T7
Remarque :
Avant l’électroporation, purifiez sur colonne le mélange de ligature en utilisant, par exemple, le kit de purification par PCR GeneJET, †K0701, ou extrayez-le au chloroforme. L’électroporation est inhibée par la présence de protéines et de sels dans le mélange.
Résistance aux antibiotiques des bactéries : Ampicilline (AmpR)
Méthode de clonage : Enzyme de restriction/MCS, PCR Blunt
Format : Kit
Type d’échantillon : Produits de PCR
À utiliser avec (application) : Clonage PCR
Nbre de réactions : 20 réactions
Gamme de produits : CloneJET
Type de produit : Kit de clonage par PCR
Quantité : 20 réactions
Vecteur : pJET1,2 / blunt
