Le kit de clonage par PCR CloneJET est un système perfectionné de sélection positive pour un clonage extrêmement efficace des produits de la PCR générés avec tout ADN polymérase thermostable. Tout autre fragment d’ADN à extrémités franches ou adhérentes peut être cloné. Il est idéal pour les fragments d’ADN phosphorylés ou non phosphorylés. La ligature dans le vecteur de sélection positive inclus ne prend que 5 minutes, et son rendement est de plus de 99 % de clones recombinants. Les produits PCR à extrémités franches générés avec une enzyme corrective sont ligaturés directement dans le vecteur de clonage.
Les produits PCR générés soit avec des ADN polymérases sans activité corrective soit avec des mélanges d’ADN polymérases sont débarrassés des extrémités avant la ligature en 5 minutes grâce à l’enzyme de coupe franche d’ADN, thermostable, fournie avec le kit. Toutes les souches de laboratoire courantes à base d’E. coli peuvent être transformées directement avec le produit de ligature.
Points clés
Le kit de clonage par PCR CloneJET contient un nouveau vecteur de clonage à sélection positive prêt à l’emploi : pJET1,2 / blunt. Le vecteur contient un gène d’enzyme de restriction létale qui est perturbé par ligature d’un insert d’ADN dans le site de clonage. Résultat : seules les cellules bactériennes avec plasmides recombinants sont capables de former des colonies. Les molécules recircularisées du vecteur pJET1,2 / blunt auxquelles il manque un insert expriment une enzyme de restriction létale qui tue la cellule E. coli hôte après transformation. Cette sélection positive accélère de façon radicale le processus d’analyse des colonies et élimine les coûts supplémentaires liés à la sélection bleu / blanc.
Pour plus de commodité pour la cartographie et la manipulation de l’insert, le site de clonage multiple du vecteur de clonage pJET1,2 / blunt contient deux séquences de reconnaissance BglII à côté du site d’insertion. En outre, le vecteur contient un promoteur T7 pour la transcription in vitro et in vivo ainsi que pour le séquençage de l’insert.
Points clés
- Rapidité : clonage PCR en à peine 5 minutes
- Efficacité maximale : plus de 99 % de clones positifs
- Pas de bruit de fond de clonage : vecteur à sélection positive
- Polyvalent : convient parfaitement au clonage d’extrémités tronquées ou cohésives
- Économique : pas de sélection blanc / bleu coûteuse
