Pour plasmides à nombre élevé de copies issus d’E. coli
Les kits de purification de plasmides NucleoBond™ intègrent la technologie NucleoBond™ AX, un échangeur d’anions à base de silice développé pour la séparation courante de différentes classes d’acides nucléiques, permettant une activité biologique supérieure des acides nucléiques purifiés et rendant possible des récupérations de masse élevées en réduisant au minimum les effets d’adsorption non spécifiques.
Les bactéries récoltées dans le bouillon de culture sont lysées à l’aide d’une procédure alcaline/SDS modifiée. L’ADN chromosomique et l’ADN plasmide sont dénaturés dans ces conditions alcalines. L’acétate de potassium est ensuite ajouté au lysat dénaturé, provoquant la formation d’un précipité contenant l’ADN chromosomique et d’autres composés cellulaires, neutralisant ainsi le lysat. L’ADN plasmide, qui reste en solution, peut revenir à sa structure native superenroulée. Après équilibrage de la colonne NucleoBond™ AX appropriée, le lysat clarifié est appliqué et l’ADN plasmide est lié à la résine échangeuse d’anions. Après les étapes de lavage suivantes, l’ADN plasmide purifié est élué dans un tampon de force ionique élevée et précipité avec de l’isopropanol. Enfin, l’ADN plasmide est reconstitué dans un tampon TE pour une utilisation ultérieure. Le finaliseur NucleoBond™ peut également être utilisé pour la concentration et la désalinisation de l’ADN plasmide élué. Les filtres pliés NucleoBond™ (inclus dans les kits Midi (PC 100), Maxi (PC 500), Mega (PC 2 000) et Giga (PC 10 000)) éliminent l'étape de centrifugation après la lyse alcaline. Les filtres réduisent le temps de “manipulation” et éliminent les déchets en plastique communs aux autres systèmes de filtration. L’élimination complète du SDS et des débris cellulaires des échantillons de plasmides est achevée au cours d’une opération ne nécessitant pas de surveillance qui dure environ 2 min (Midi) et 10 min (Maxi). Les filtres pliés NucleoBond™ n’induisent pas de cisaillement des constructions ADN de grande taille, telles que PAC ou BAC. Types de kit et leurs composants : NucleoBond™ Mini (PC 20) - colonnes NucleoBond™ AX 20, tampons, Rnase A.NucleoBond™ Midi (PC 100) - colonnes NucleoBond™ AX 100, tampons, Rnase A, filtres pliés.NucleoBond™ Maxi (PC 500) - Colonnes NucleoBond™ AX 500, tampons, Rnase A, filtres pliés XL.NucleoBond™ Mega (PC 2000) - Colonnes NucleoBond™ AX 2000, tampons, Rnase A, filtres pliés XL.NucleoBond™ Giga (PC 10,000) - colonnes NucleoBond™ AX 10 000, tampons, RNase A, filtres pliés. Pour plus d'informations sur ce produit, veuillez contacter le service clientèle.
Purification d’ADN plasmide à nombre de copies faible et élevé issu d’
adapté à la transfection, au séquençage et au clonage.
| Marque | Macherey-Nagel |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-143404 |
| Réf. fabricant | 12778452 |
| Format | Mini Gravity-flow Column |
| Isolation Technology | Technologie de chromatographie échangeuse d’anions |
| À utiliser avec (application) | Pour plasmides à nombre élevé de copies issus d’E. coli |
| Nbre de réactions | 20 |
| Type de produit | Colonnes NucleoBond™ AX 20 |
| Heure du test | 60min. |
| Rendement | 3 to 20μg |
