Le kit TA Cloning s’appuie sur le vecteur de clonage pCR2.1 et la ligase d’ADN ExpressLink T4 de façon à générer, à température ambiante et en quinze minutes, un produit de ligature. Les réactions permettent généralement d’obtenir > 80 % de produits recombinants comportant des inserts.
- Rapide et pratique : 15 minutes, ligature à température ambiante
- Efficacité : analyse des bleus / blancs et > 80 % de clones avec insert correct
- Flexibilité : résistance à la kanamycine ou à l’ampicilline, offrant ainsi le choix de l’antibiotique souhaité
- Facilité : élimination de toute modification enzymatique du produit PCR
- Simplification : aucune amorce de PCR associée à des sites de restriction nécessaire
- Fournit des saillies 3’-T pour la ligature directe des produits de PCR amplifiés par Taq
- Accélérateur de T7 pour la transcription et le séquençage in vitro de l’ARN
- Lieur multisite flexible avec sites EcoR I de flanquement pour faciliter l’excision des inserts
- Sites d’amorce M13 directs et inversés pour le séquençage
- Fonctionnement du TA Cloning
- L’activité dissociée de tout modèle de la polymérase Taq confère une désoxyadénosine (A) unique aux extrémités 3’ des produits de PCR.
- Le vecteur linéarisé fourni dans ce kit comporte des résidus de désoxythymidine 3’ (T) simple.
- Ceci permet aux inserts de PCR de se ligaturer de façon efficace avec le vecteur.
Clonage, clonage par PCR
