Permet une stratégie de clonage très efficace en une seule étape et en 5 minutes (“Clonage TOPO”) pour l’insertion directe de produits PCR amplifiés par polymérase Taq dans un vecteur plasmidique à des fins de séquençage
Chaque kit utilise le vecteur TA pCR4-TOPO™ avec des sites d’amorce de séquençage spécifiquement conçus, qui permettent, pour chaque réaction, d’augmenter la séquence d’insert et de réduire celle du vecteur. Le kit inclut tout ce dont vous avez besoin pour cloner et sélectionner les vecteurs recombinants contenant le fragment de PCR de votre choix.
Vecteur TA pCR4-TOPO : Optimisé pour le séquençage
Nous avons éliminé la majeure partie du site de clonage multiple du vecteur TA pCR4- TOPO pour raccourcir la distance entre les sites d’amorce de séquençage et le site d’insertion à une valeur aussi faible que 33 bp. Résultat : les réactions de séquençage diminuent la séquence de vecteur et augmentent celle de l’insertion. Le vecteur TA pCR4-TOPO comprend des sites pour quatre amorces de séquençage communes : M13 direct, M13 inverse, T7 et T3. Les kits incluent une aliquote de chaque.
Sélection et manipulation de clones TA pCR4-TOPO
Le vecteur TA pCR4-TOPO contient à la fois des Marquages de résistance à l’ampicilline et à la kanamycine et une fusion de gènes LacZα-ccdB pour une sélection positive et une sélection bleu/blanc. Le site de clonage multiple minimisé du vecteur inclut toujours des sites EcoRI de flanquement pour l’excision simplifiée des produits de PCR clonés et un site Sse8387I unique pour la génération des suppressions imbriquées avant le séquençage. Les promoteurs T7 et T3 sont également présents pour la transcription in vitro.
Clonage simplifié basé sur TOPO
Grâce à la technologie de clonage TOPO, il n’est pas nécessaire d’utiliser des amorces pour PCR contenant des séquences spécifiques ou des procédures post-PCR, de préparer les vecteurs ni d’effectuer d’autres étapes de manipulation longues d’ADN. Il suffit d’ajouter votre réaction PCR directement dans le vecteur chargé en topoisomérase, d’incuber pendant 5 minutes et de la transformer avec les cellules compétentes E. coli fournies.
Clonage efficace
Avec jusqu’à 95 % de clones porteurs de l’insert désiré, vous n’avez plus besoin d’analyser autant de clones, ce qui vous permet de gagner du temps et de l’argent. Le vecteur TA pCR4-TOPO utilisé dans ce kit est livré avec des saillies de 3’T pour une ligature efficace des produits PCR amplifiés Taq avec des saillies de 3’A.
La norme du clonage
En matière de clonage, la technologie de clonage TOPO™ est un partenaire fiable pour des milliers de scientifiques depuis plus de dix ans. Rapide, simple à utiliser et efficace, le clonage TOPO™ a été appliqué à de nombreux vecteurs différents pour un large éventail d’applications.
Kits de séquençage TOPO TA Cloning - Options de kit
Le kit de séquençage TOPO TA Cloning peut être acheté avec diverses cellules compétentes offrant différents avantages selon vos besoins :
Biologie de la chromatine, immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), clonage, analyse de la méthylation, clonage PCR, ARNi, recherche sur l’épigénétique et l’ARN non codant, séquençage de l’ADN traité par bisulfite
