Le kit de dosage de coactivateur de récepteur d’androgène TR-FRET LanthaScreen™ offre une méthode sensible et robuste pour le criblage à haut débit des ligands de récepteur d’androgène potentiel (AR) en tant qu’agonistes du recrutement de coactivateurs ou antagonistes du recrutement de coactivateurs dépendants des agonistes. Dans les modes agoniste et antagoniste, L'essai homogène en mélange et en lecture utilise un domaine de liaison au ligand AR de rat (AR-LBD) marqué à l’hexahistidine et la glutathion-S-transférase (GST) (également disponible séparément), un anticorps anti-GST marqué au terbium (Tb) et un peptide coactivateur marqué à la fluorescéine.
Points forts
Mode antagoniste
Lors de l’exécution du dosage de coactivateur de récepteur d’androgène LanthaScreen TR-FRET en mode agoniste (pour identifier les composés agonistes), l’AR-LBD est ajouté aux composés de dosage de ligand, suivi d’un mélange du peptide de coactivateur fluorescéine et de l’anticorps anti-GST marqué au Tb. Après incubation à température ambiante, le rapport d’émission TR-FRET 520:495 nm est calculé et utilisé pour déterminer la EC50 à partir d’une courbe de réponse du dosage du composé. Ce ligand EC50 est une valeur composite représentant la quantité de ligands nécessaire pour se lier au récepteur, effectuer un changement conformationnel et recruter le peptide coactivateur (voir figure).
Mode antagoniste
Lors de l’exécution du dosage de coactivateur de récepteur d’androgène LanthaScreen TR-FRET en mode antagoniste (pour identifier les composés antagonistes), l’AR-LBD est ajouté aux composés de dosage de ligand, suivi d’un mélange d’agoniste DHT, de peptide de coactivateur de fluorescéine et d’anticorps anti-GST marqué au Tb. La concentration d’agoniste DHT utilisée dans ce mode est la concentration EC80 telle que déterminée par la première exécution du dosage en mode agoniste. Un exemple de données produites en mode antagoniste est illustré dans la figure ci-dessous.
Caractéristiques techniques
| Marque | Invitrogen |
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| Réf. B-LABO | BL-RE-102366 |
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| Réf. fabricant | 15302098 |
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| Contenu et stockage | 1 tube AR Ligand Binding Domain Recombinant Protein (store at -68 to -85°C)<br>1 tube Peptide (store at -5 to -30°C)<br>2 bottles TR-FRET Buffer (store at -5 to -30°C)<br>1 tube Tb-Anti-GST Ab (store at -5 to -30°C)<br>1 tube of DTT (store at -5 to -30°C) |
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| Gamme de produits | LanthaScreen™ |
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| À utiliser avec (application) | Test d’interaction co-factorielle, dosage des récepteurs nucléaires |
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| Ligand | AR |
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| Type de produit | Kit de dosage du coactivateur de récepteur d’androgène TR-FRET |
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| No. of Assays | 800 x 20 μL assays |
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