Kit ELISA sandwich
The Human FAK (Total) ELISA Kit is designed to detect and quantify the level of FAK (Total) in fresh or frozen human, mouse or rat cell lysates. The assay recognizes both natural and recombinant FAK (Total), independent of its phosphorylation state. Principle of the method A monoclonal capture antibody specific for FAK (Total) has been coated onto the wells of the 96-well plate. During the first incubation, standards of known content and unknown samples are pipetted into the wells and the antigen binds to the immobilized (capture) antibody. After washing, a rabbit antibody specific for the target protein is added to the wells and serves as a detection antibody by binding to the immobilized protein captured during the first incubation. After washing, a horseradish peroxidase labeled anti-rabbit IgG is added. This binds to the detection antibody to complete the four member sandwich. After a third incubation and washing to remove all the unbound enzyme, a substrate solution (TMB) is added, which is acted upon by the bound enzyme to produce color. The intensity of this colored product is directly proportional to the concentration of target protein present in the original specimen and the optical density can be read on a standard microplate reader. Rigorous validation Each manufactured lot of this ELISA kit is quality tested for criteria such as sensitivity, specificity, precision, and lot-to-lot consistency. See manual for more information on validation.
La kinase d’adhérence focale (FAK) est une protéine tyrosine kinase non réceptrice de 125 kDa qui agit comme substrat pour la Src et est un élément clé de la signalisation de l’intégrine. La FAK joue un rôle important dans la propagation, la différenciation, la migration, la mort cellulaire et l’accélération de la transition de phase G1 à S du cycle cellulaire. La tyrosine 397 est le site d’autophosphorylation de la FAK et participe à son activation initiale. Ce site phosphorylé lie les domaines SH2 de la famille Src et la sous-unité p85 de PI3-Kinase et active la migration et l’invasion cellulaires. La FAK a un domaine catalytique central et une extrémité C-terminale qui la localisent aux adhérences focales, qui sont des sites où les cellules se fixent à la matrice extracellulaire via les récepteurs de l’intégrine de surface. Une augmentation de la phosphorylation de la tyrosine de la FAK survient lors de l’engagement de l’intégrine avec la fibronectine. L’adhérence des fibroblastes murins NIH3T3 à la fibronectine favorise l’association de la protéine adaptatrice Grb2 et le c-Src PTK avec la FAK in vivo et engendre également l’activation de la kinase ERK2 MAP. Dans le NIH3T3 transformé par v-Src, l’association de v-Src, Grb2, et Sos avec la FAK est indépendante de l’adhérence cellulaire à la fibronectine. In vitro, le domaine SH2 de Grb2 se lie directement à la FAK phosphorylée à la tyrosine et le site de liaison a été identifié comme Tyr925 par mutagénèse dirigée par le site. Plusieurs variantes de transcription codant différentes isoformes ont été trouvées pour le gène FAK, mais les natures de longueur totale de seulement trois d’entre elles ont été déterminées.
Conditions d’expédition : Glace humide
| Marque | Invitrogen |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-106169 |
| Réf. fabricant | 10314063 |
| Numéro d’adhésion | O35346, P34152, Q05397 |
| Plage de dosage | 1,6-100 ng/ml |
| Sensibilité du dosage | <1,6 ng |
| Concentration | 1,6 à 100 ng/ml |
| Conjugué | HRP |
| Type de produit | Kit ELISA |
| Type d’échantillon | Lysats cellulaires |
| Type de substrat | Kinases de tyrosine cytoplasmique |
| Espèces cibles | Souris, rat |
| À utiliser avec (équipement) | Lecteur de microplaques colorimétriques |
| Identification génétique (Entrez) | 14083, 25614, 5747 |
| Symbole de gène(s) | Ptk2 |
| Temps d’incubation | 4 h |
| Coefficient de variation inter-dosage | 7,4% |
| Coefficient de variation intra-dosage | 4,6% |
| Contenus des kits | Plaque à 96 puits pré-enduite, Étalon, Tampon de dilution standard, Détection d'anticorps, Anti-lapin HRP, Diluant HRP, Tampon de lavage, Chromogène, Solution d’arrêt, Couvercles de plaques adhésives |
| Marqueur ou colorant | HRP |
| Marqueur génétique | Analyse FAK |
| Quantité | 96 tests |
| État réglementaire | RUO |
| Volume d’échantillon | Lysat cellulaire ,10 μl |
| Conditions de stockage | 2°C à 8°C |
| Cible | Humain, souris et rat |
| Heure du test | 1 h 20 min |
| Durée totale du dosage | 4 h |
