ELISA compétitif
L’AMP cyclique compétitive ELISA quantifie l’AMPc dans les lysats cellulaires ou tissulaires. Le test reconnaîtra exclusivement l’AMP cyclique naturelle et recombinante.
Principe de la méthode : l’ELISA (essai immuno-enzymatique) sandwich en phase solide d’AMP cyclique est conçu pour mesurer la quantité du lien de la cible entre une paire d’anticorps appariée. Un anticorps spécifique à la cible a été prérevêtu dans les puits de la microplaque fournie. Des échantillons, des normes ou des contrôles sont ensuite ajoutés à ces puits et se lient à l’anticorps immobilisé (capture). Le sandwich est formé par l’ajout du second anticorps (détecteur), se liant à la cible sur un épitope différent de l’anticorps de capture. Une enzyme conjuguée a été incorporée dans le dosage. Après les étapes d’incubation et de lavage pour éliminer la microplaque des substances non liées, une solution de substrat est ajoutée et réagit avec le complexe enzyme-anticorps-cible pour produire un signal mesurable. L’intensité de ce produit coloré est inversement proportionnelle à la concentration de TP (p) présente dans l’échantillon d’origine.
Chaque lot fabriqué de ce kit ELISA voit sa qualité testée pour des critères tels que la sensibilité, la spécificité, la précision et la constance de lot à lot. Consultez le manuel du produit pour plus d’informations concernant la validation.
L’adénosine monophosphate cyclique (cAMP) joue un rôle clé en tant que deuxième messager intracellulaire pour les événements de transduction qui suivent un certain nombre de signaux extracellulaires. Les récepteurs couplés G-Protein (GPCR) constituent la plus grande famille de récepteurs de surface cellulaire. Ils peuvent être activés par différents ligands, tels que les neurotransmetteurs, les hormones, les ions, les petites molécules, les peptides et d’autres molécules de signalisation physiologique. Généralement, la liaison des ligands à son récepteur, ce qui entraîne l’activation des protéines G, en retour, active l’effecteur adénylcyclase évoquant la production de cAMP. L’activation d’une protéine kinase par l’AMPc entraîne la phosphorylation des protéines du substrat. Actuellement, des médicaments efficaces en commercialisation ont été mis au point pour cibler ces récepteurs. Parmi les RPCG, ∽367 récepteurs sont des cibles potentielles de développement de médicaments, mais seulement environ 20 ont été utilisés pour générer des médicaments thérapeutiques et commerciaux à ce jour. Comme l’implication de cAMP peut amplifier la réponse de la liaison du ligand, le second messager cAMP a été largement utilisé pour surveiller l’activation de la GPCR afin de faciliter la découverte de médicaments thérapeutiques.
| Marque | Invitrogen |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-108124 |
| Réf. fabricant | 10425545 |
| Plage de dosage | 0,078– 20 pmol/ml |
| Sensibilité du dosage | 0,037 pmol/ml |
| Format du kit d’immunoessai | ELISA colorimétrique (substrat de p-NPP) dans des plaques à 96 puits claires |
| Type de produit | Kit ELISA |
| Type d’échantillon | Homogénats tissulaires, Lysats cellulaires |
| Spécificité | Aucune réaction croisée significative avec l’AMP, l’ATP, les BPFa, le GTP, le cUMP ou le CTP |
| Suffisant pour | 96 puits de microplaques |
| Espèces cibles | Humaine |
| À utiliser avec (équipement) | Lecteur de microplaques colorimétriques |
| Coefficient de variation inter-dosage | 7.1% |
| Coefficient de variation intra-dosage | 6.5% |
| Contenus des kits | Plaque à 96 puits pré-enduite, Scelleuse pour plaques, Thermoscelleur pour plaques, 1 par unité, Réactif neutralisant, Triéthylamine, Réactif neutralisant, Étalon, Anhydride acétique, Solution de substrat pNPP, Tampon de lavage 20X, Solution de substrat pNPP, Solution d’arrêt |
| Marqueur ou colorant | AP |
| Mesure | Absorbance à 405 nm moins absorbance à 570 nm |
| Précision | Dépend du type, du niveau et du dosage de l’échantillon |
| Quantité | 96 Tests |
| État réglementaire | RUO |
| Volume d’échantillon | Lysat cellulaire, 100 μl ; homogénat tissulaire, 100 μl |
| Conditions de stockage | -20°C |
| Cible | Humaine |
| Heure du test | 1 h 20 min |
| Durée totale du dosage | 3 h |
