La caractérisation, l’identification et la quantification des protéines par MS commencent par une digestion efficace et reproductible des protéines. Les protéases spécifiques à une séquence sont utilisées pour cliver les protéines en fragments plus petits ou peptides. La trypsine est la protéase de choix pour la digestion des protéines. Cependant, la digestion séparée ou séquentielle avec des protéases alternatives peut améliorer la couverture des séquences de protéines individuelles, ou générer des séquences peptidiques uniques pour différentes applications MS.
La protéase Thermo Scientific™ Pierce™ Lys-C, de qualité MS, est une endoprotéinase native hautement purifiée, validée pour une activité et une stabilité maximales dans les applications protéomiques.
Caractéristiques de la protéase Thermo Scientific™ Pierce™ Lys-C, de qualité MS :
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Points forts
Digestion améliorée
: utilisation en tandem avec la trypsine pour diminuer les clivages ratés tryptiques
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Meilleure couverture des séquences
: la meilleure caractérisation des protéines résulte du chevauchement des peptides, avec des propriétés complémentaires de chromatographie, d’ionisation et de fragmentation
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Polyvalence
: activité enzymatique efficace dans des conditions hautement dénaturantes (par exemple avec de l’urée 8 M)
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spécificité C-terminale de clivage de la lysine
:au moins 90 % pour un échantillon protéique complexe
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Stabilité
: fourni dans un format lyophilisé
Détails du produit
Il s’agit d’une protéase à sérine de spectrométrie de masse de qualité MS isolée des enzymogènes Lysobacter. La protéase Lys-C possède une activité et une spécificité élevées pour les résidus de lysine, ce qui entraîne une augmentation de la taille des peptides et une réduction de la complexité des échantillons par rapport à la trypsine (c’est-à-dire, moins de peptides). Contrairement à la trypsine, la protéase Lys-C peut cliver des lysines suivies de prolines, ce qui en fait une protéase idéale pour la digestion de protéine séquentielle suivie par de la trypsine pour diminuer les clivages ratés. Ces propriétés uniques de la protéase Lys-C garantissent une efficacité de digestion élevée lorsqu’elle est utilisée seule ou suivie d’une digestion tryptique. De plus, les peptides prototypiques de la Lys-C ont en général des états de charge plus élevés, ce qui fait de cette protéase une enzyme de choix pour utilisation avec une fragmentation ETD.
La protéase Lys-C se retrouve couramment dans des flux de travaux d’enrichissement de phosphopeptides parce qu’elle génère des peptides avec des amines primaires au niveau des extrémités N et C, ce qui permet aux fragments d’être doublement marqués avec des marqueurs isobares réactifs aux amines. Cela entraîne une amélioration de l’ionisation des peptides ainsi que des limites d’analyse quantitative puisque davantage d’ions en fragments peuvent être de nouveau isolés pendant l’acquisition MS3. Cette enzyme peut être utilisée pour des flux de travaux de digestion en solution ou en gel afin de produire des peptides pour l’identification de protéines par LC-MS/MS. Cette enzyme Lys-C est lyophilisée (20 µg ou 100 µg de quantités).
Applications
• Couverture de séquences améliorée des produits issus de la digestion des protéines
• Séquençage de novo
Caractéristiques techniques
| Marque | Thermo Scientific |
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| Réf. B-LABO | BL-RE-127134 |
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| Réf. fabricant | 15561995 |
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| À utiliser avec (équipement) | Spectromètre de masse |
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| Type de produit | Protéase |
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| Gamme de produits | Pierce™ |
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| Contenu et stockage | Conserver au congélateur (entre -5 et -30°C). |
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| Conditions d’expédition | Glace humide |
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| Matériau de départ | Échantillons de protéines, lysat cellulaire |
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| Type de produit final | Peptide |
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| Méthode de détection | Spectrométrie de masse |
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| Étape du flux de travail | Digestion des protéines |
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| Quantité | 100 μg |
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