L’immunoprécipitation est souvent nécessaire pour la détection et l’analyse quantitative de protéines en faible abondance ou d’événements de signalisation rares. L’analyse par spectrométrie de masse repose sur deux méthodes de détection des protéines en faible abondance : le suivi de réaction unique (SRM) et la surveillance de réaction parallèle (PRM), qui permettent l’isolement, la planification et l’analyse quantitative de peptides protéotypiques sélectionnés. Ces kits IP ont été optimisés pour une immunoprécipitation et une co-immunoprécipitation efficaces des protéines cibles, et sont directement compatibles avec la préparation et l’analyse d’échantillons MS en aval.
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Points forts
Compatibilité avec la spectrométrie de masse
: réactifs directement compatibles avec les digestions de peptides en solution
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Sensible
: la procédure enrichit avec succès les protéines de faible abondance (plage de ng faible)
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Bruit de fond faible
: les échantillons enrichis contiennent un minimum de résidus de détergent
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Réduction de la contamination des anticorps
: la biotinylation des anticorps avec la streptavidine réduit la contamination de l’éluat par rapport à d’autres méthodes IP
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Robuste
: la procédure et les réactifs ont été vérifiés avec de nombreuses cibles pour assurer un enrichissement homogène des protéines peu abondantes (plage de ng) avec au moins deux peptides identifiés par protéine
Le kit IP magnétique Thermo Scientific Pierce compatible avec la spectrométrie de masse (protéine A/G) utilise des microbilles magnétiques Pierce de protéine A/G de haute qualité pour offrir une plus grande flexibilité de capture d’anticorps que la protéine A ou G seule. Le kit IP magnétique compatible avec la spectrométrie de masse Thermo Scientific Pierce (streptavidine) utilise des microbilles magnétiques de streptavidine Pierce de haute qualité pour une utilisation avec des anticorps biotinylés qui peuvent être achetés dans le commerce ou marqués à l’aide du kit de biotinylation d’anticorps Pierce pour immunoprécipitation. Après la procédure d’immunoprécipitation, la fraction d’élution enrichie par cible est prête pour la digestion tryptique en solution pour l’analyse LC-MS sans avoir besoin de purification de gel, d’élimination de détergent ou de dessalage. En outre, les réactifs et les procédures ont été validés à l’aide d’une séparation magnétique manuelle et automatisée.
Applications
• Enrichissement de cibles à faible abondance pour améliorer la sensibilité MS
• Identification des protéines cibles qui ne sont pas détectables par transfert Western
Caractéristiques techniques
| Marque | Thermo Scientific |
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| Réf. B-LABO | BL-RE-127170 |
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| Réf. fabricant | 15302627 |
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| À utiliser avec (équipement) | KingFisher™ Flex, support magnétique |
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| Type de produit | Kit IP magnétique |
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| Gamme de produits | Pierce™ |
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| Suffisant pour | 40 réactions |
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| Contenu et stockage | Microbilles magnétiques de streptavidine, 1 ml<br>Tampon de lyse cellulaire IP-MS, 100 ml<br>Tampon de lavage IP-MS A, 75 ml<br>Tampon de lavage IP-MS B, 40 ml<br>Tampon d’élution IP-MS, 6 ml<br><br>Stocker au réfrigérateur (entre 2° et 8°C). |
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| Matériau de départ | Échantillons de protéines, lysat cellulaire |
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| Type de produit final | Protéine |
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| Méthode de détection | Spectrométrie de masse |
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| Format | Kit |
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| Étape du flux de travail | Enrichissement des échantillons |
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| Quantité | 1 kit |
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| À utiliser avec (application) | Spectrométrie de masse |
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