Kit de réactifs et protocole pour la réticulation des anticorps IP à l’agarose de protéine A / G afin de permettre l’immunoprécipitation de l’antigène sans contamination des anticorps.
Contenu et stockage
Suffisant pour : Préparation et réalisation d’au moins 50 réactions IP, chacune avec 10 µl de résine • Agarose avec protéine A / G Plus, 0,55 ml • Réticulation DSS, 8 x 2 mg • Tampon de couplage (20X), 25 ml • Tampon de lyse / lavage IP de 2 x 50 ml, • Tampon de conditionnement (100X), 5 ml • Solution saline tamponnée au Tris (20X), 25 ml • Tampon d’élution, 50 ml, • Tampon d’échantillon avec marqueur de piste (5X), 5 ml • Résine d’agarose de contrôle, 2 ml, • Colonnes de centrifugation et tubes de prélèvement
Stocker à 4°C. Stocker le DSS sous forme desséchée à 4°C.
Doser
Purification par affinité
À utiliser avec (équipement)
Microcentrifugeuse
Gamme de produits
Pierce™
Quantité
1 kit
Marque
Thermo Scientific
Le kit d’IP de réticulation Thermo Scientific™ Pierce est une adaptation des protocoles d’immunoprécipitation traditionnels qui permet la récupération des antigènes sans contamination des anticorps ou coélution.
Ce kit d’immunoprécipitation étend les fonctionnalités des méthodes traditionnelles d’immunoprécipitation (IP) en ajoutant à la procédure la technologie de réticulation et la manipulation des échantillons par colonne de centrifugation pour microcentrifugeuses. Des caractéristiques qui permettent notamment de purifier la protéine ciblée sans aucune contamination par des anticorps, ainsi que de laver et de séparer de façon plus efficace les échantillons de la résine d’agarose en microbilles.
La méthode observée par le kit IP de réticulation Pierce implique la capture de l’anticorps IP par une résine d’agarose précipitant la protéine A/G, et l’immobilisation covalente de celle-ci sur le support par réticulation avec du subérate de disuccinimidyle (DSS). La résine contenant les anticorps est alors incubée avec l’échantillon contenant l’antigène protéique d’intérêt, permettant ainsi la formation d’un complexe anticorps/antigènes. Après un lavage visant à éliminer les composants non liés (probablement non souhaités) de l’échantillon, une dissociation de l’anticorps au moyen du tampon d’élution fourni dans le kit permet de récupérer l’antigène. La procédure est effectuée intégralement dans une coupelle de centrifugation pour microcentrifugeuse : les solutions peuvent ainsi être séparées complètement de la résine d’agarose sous l’action d’une brève centrifugation. Seul l’antigène est élué par la procédure, ce qui permet de l’identifier et de l’analyser de manière plus approfondie sans aucune interférence causée par des fragments d’anticorps. La résine contenant les anticorps peut souvent être réutilisée dans d’autres opérations d’immunoprécipitation.
Points forts
Points clés
Absence de risque de contamination par anticorps : les anticorps sont irréversiblement fixés aux billes d’agarose, minimisant ainsi la coélution de chaînes lourdes et légères avec la protéine purifiée
Évolutivité simple et efficace : utilisez uniquement la quantité d’anticorps nécessaire à une seule expérience pour IP (par exemple 5 μg) ou immobilisez jusqu’à 200 μg d’anticorps pour préparer une plus grande quantité de résine d’affinité pour IP préconstituée qui servira à la réalisation de nombreuses expériences
Fiabilité des dosages et manipulation des échantillons : les colonnes de centrifugation Pierce empêchent la perte de résine et permettent une séparation plus efficace des solutions par rapport aux méthodes traditionnelles d’IP qui n’utilisent que des microtubes à centrifuger
Possibilité de réutilisation de la résine d’affinité pour anticorps préparée : en raison de l’immobilisation covalente des anticorps et de leur résistance à la procédure d’élution douce, la résine peut souvent être utilisée plusieurs fois
Des kits complets : le kit contient suffisamment de réactifs et de colonnes de centrifugation pour pouvoir effectuer au moins 50 expériences d’immobilisations d’anticorps et d’IP
Comprend
Agarose Plus de protéine A / G Pierce, résine d’agarose de contrôle, agent de réticulation DSS, tampon de couplage, tampon de lyse / lavage par IP, tampon de conditionnement, solution saline tamponnée au Tris, tampon d’élution, tampon de chargement des échantillons, colonnes de centrifugation et tubes de prélèvement
Recommandé dans les cas suivants
Immunoprécipitation suivie d’une électrophorèse et d’une excision de la protéine pour l’analyse par spectrométrie de masse ou par identification des séquençages ; analyse par immunoprécipitation et SDS-PAGE d’une protéine cible dont le poids moléculaire est similaire au fragment d’anticorps de la chaîne lourde ou légère ; immunoprécipitation des protéines cibles pour une analyse ultérieure par des méthodes non dénaturantes (c’est-à-dire des méthodes n’impliquant pas de SDS-PAGE)
Caractéristiques techniques
Marque
Thermo Scientific
Réf. B-LABO
BL-RE-127481
Réf. fabricant
10520015
Contenu et stockage
Suffisant pour : Préparation et réalisation d’au moins 50 réactions IP, chacune avec 10 µl de résine<br>• Agarose avec protéine A / G Plus, 0,55 ml<br>• Réticulation DSS, 8 x 2 mg<br>• Tampon de couplage (20X), 25 ml<br>• Tampon de lyse / lavage IP de 2 x 50 ml,<br>• Tampon de conditionnement (100X), 5 ml<br>• Solution saline tamponnée au Tris (20X), 25 ml<br>• Tampon d’élution, 50 ml,<br>• Tampon d’échantillon avec marqueur de piste (5X), 5 ml<br>• Résine d’agarose de contrôle, 2 ml,<br>• Colonnes de centrifugation et tubes de prélèvement<br><br>Stocker à 4°C. Stocker le DSS sous forme desséchée à 4°C.
Doser
Purification par affinité
À utiliser avec (équipement)
Microcentrifugeuse
Gamme de produits
Pierce™
Quantité
1 kit
À utiliser avec (application)
Immunoprécipitation (IP)
Cible
Non spécifique à la cible
Type
Kit IP
Suffisant pour
50 réactions
Format
Kit
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