Immobilisez les anticorps IP (toutes espèces ou classes) sur des billes d’agarose sans protéine A / G pour immunoprécipiter les antigènes sans interférence d’anticorps.
Contenu et stockage
Suffisant pour : Préparation et réalisation d’au moins 50 réactions IP, chacune avec 10 µl de résine • Résine de couplage AminoLink Plus, 2 ml • Tampon de couplage (20X), 25 ml • Tampon d’extinction, 50 ml • Solution de lavage, 50 ml • Solution de cyanoborohydrure de sodium (5M), 0,5 ml • Tampon de lyse / lavage IP, 2 x 50 ml • Tampon de conditionnement (100X), 5 ml • Solution saline tamponnée au Tris (20X), 25 ml • Tampon d’élution, 50 ml • Tampon d’échantillon avec marqueur de piste (5X), 5 ml • Résine d’agarose de contrôle, 2 ml • Colonnes de centrifugation et tubes de prélèvement
Stocker à 4°C.
Doser
Purification par affinité
À utiliser avec (équipement)
Microcentrifugeuse
Gamme de produits
Pierce™
Quantité
1 kit
Marque
Thermo Scientific
Le kit IP Thermo Scientific™ Pierce Direct permet l'immunoprécipitation avec n'importe quelle espèce ou classe d'anticorps et produit de l'antigène purifié sans contamination par l'anticorps IP.
Informations complémentaires et commande en ligne
Ce kit d’immunoprécipitation directe représente un progrès significatif dans la technologie d’immunoprécipitation (IP) car il remplace l’utilisation de la protéine A immobilisée ou de la protéine G par une méthode d’adhérence par covalence directe des anticorps à la résine d’agarose sous forme de billes. Les principaux avantages résultant de cette méthode est la possibilité d’utiliser toute espèce ou sous-classe d’anticorps purifiés (pas seulement les types qui se lient à la protéine A ou G) et la capacité de purifier la protéine cible sans contamination par l’anticorps. La méthode permet également d’immunoprécipiter les antigènes des échantillons de sérum sans co-purifier les immunoglobulines non ciblées. Enfin, le kit utilise des coupelles de centrifugation pour laver et séparer efficacement les échantillons de la résine d’agarose sous forme de billes.
Points forts
Points clés
Nécessite moins de 10 μg d’anticorps : la procédure optimisée pour les anticorps ne nécessite que 2 à 10 μg d’anticorps pour une seule expérience pour IP, pas plus que ce qui est nécessaire pour les méthodes traditionnelles pour IP
Évolutivité simple et efficace : utilisez uniquement la quantité d’anticorps nécessaire à une seule immunoprécipitation ou immobilisez jusqu’à 200 μg d’anticorps pour préparer une plus grande quantité de résine d’affinité pour IP préconstituée qui servira à la réalisation de nombreuses expériences
Risque minimal de contamination par anticorps : les anticorps sont irréversiblement fixés aux billes d’agarose, minimisant ainsi la coélution de chaînes de toutes tailles avec la protéine purifiée (c’est-à-dire moins de 5 %)
IP avec n’importe quelle espèce et sous-classe d’anticorps : utilisez l’IgY de poulet, l’IgE humaine, l’IgM de souris ou toute autre protéine purifiée
Possibilité de réutilisation de la résine d’affinité pour anticorps préparée : en raison de l’immobilisation covalente des anticorps et de leur résistance à la procédure d’élution douce, la résine peut souvent être utilisée plusieurs fois
Manipulation pratique des échantillons : les colonnes de centrifugation Pierce éliminent la perte de résine et permettent une séparation efficace des solutions
Étape 1 : Fixez l’anticorps à la résine d’agarose
La première étape de la méthode d’IP Direct consiste à préparer la résine d’affinité des anticorps par IP. L’anticorps pur est incubé dans un tampon de phosphate avec un volume approprié de résine de couplage AminoLink™ Plus, une résine d’agarose au plomb activée par l’aldéhyde sous forme de billes. Au cours de l’incubation, différents aminés-epsilon de lysine à la surface de la molécule d’anticorps de grande taille réagissent avec des groupes d’aldéhyde sur la résine pour former des liaisons à base de Schiff qui sont ensuite stabilisées en liaisons d’amines secondaires en présence de cyanoborohydrure. La réaction d’immobilisation, connue sous le nom d’amination réductrice, est non dénaturante et entraîne généralement une efficacité de couplage d’anticorps supérieure à 85 % avec une perte minimale de fonction de liaison aux antigènes.
Étape 2 : Effectuez des expériences d’immunoprécipitation
Après sa préparation, la résine d’anticorps peut être utilisée dans plusieurs aliquotes parallèles ou totaux pour des expériences par IP. La résine contenant les anticorps est incubée avec l’échantillon contenant l’antigène protéique d’intérêt, permettant ainsi la formation d’un complexe anticorps/antigènes. Après un lavage visant à éliminer les composants non liés (probablement non souhaités) de l’échantillon, une dissociation de l’anticorps au moyen du tampon d’élution fourni dans le kit permet de récupérer l’antigène. La procédure est effectuée intégralement dans une coupelle de centrifugation pour microcentrifugeuse : les solutions peuvent ainsi être séparées complètement de la résine d’agarose sous l’action d’une brève centrifugation. Seul l’antigène est élué par la procédure, ce qui permet de l’identifier et de l’analyser de manière plus approfondie sans aucune interférence causée par des fragments d’anticorps. La résine contenant les anticorps peut être réutilisée dans d’autres opérations d’immunoprécipitation.
Comprend
Résine de couplage AminoLink Plus, tampon de couplage, tampon d’extinction, solution de lavage, solution de cyanoborohydrure de sodium, tampon de lyse / lavage IP, tampon de conditionnement, solution saline tamponnée au Tris, tampon d’élution, tampon d’échantillon marqueur de bande, résine d’agarose de contrôle, colonnes de centrifugation et tubes de prélèvement
Caractéristiques techniques
Marque
Thermo Scientific
Réf. B-LABO
BL-RE-127747
Réf. fabricant
11853865
Contenu et stockage
Suffisant pour : Préparation et réalisation d’au moins 50 réactions IP, chacune avec 10 µl de résine<br>• Résine de couplage AminoLink Plus, 2 ml<br>• Tampon de couplage (20X), 25 ml<br>• Tampon d’extinction, 50 ml<br>• Solution de lavage, 50 ml<br>• Solution de cyanoborohydrure de sodium (5M), 0,5 ml<br>• Tampon de lyse / lavage IP, 2 x 50 ml<br>• Tampon de conditionnement (100X), 5 ml<br>• Solution saline tamponnée au Tris (20X), 25 ml<br>• Tampon d’élution, 50 ml<br>• Tampon d’échantillon avec marqueur de piste (5X), 5 ml<br>• Résine d’agarose de contrôle, 2 ml<br>• Colonnes de centrifugation et tubes de prélèvement<br><br>Stocker à 4°C.
Doser
Purification par affinité
À utiliser avec (équipement)
Microcentrifugeuse
Gamme de produits
Pierce™
Quantité
1 kit
À utiliser avec (application)
Co-précipitation, immunoprécipitation (IP)
Cible
Anticorps
Type
Kit IP
Suffisant pour
50 réactions
Format
Kit
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