L’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est une méthode efficace pour produire du baculovirus pour l’expression de protéines de haut niveau dans les cellules d’insectes. Elle repose sur la génération de virus recombinant par transposition spécifique au site dans l’E. coli plutôt que sur la recombinaison homologue dans les cellules d’insectes. Nouveau : vecteurs pFastBacTOPO™ !
Expression protéique fiable et rapide
Le système d’expression du Baculovirus Bac-to-Bac™ est plus rapide et plus facile que l’expression traditionnelle du baculovirus et maintient des niveaux élevés d’expression protéique. Le Bac-to-Bac™ repose sur la génération de baculovirus recombinant par transposition spécifique au site dans l’E. coli plutôt que sur une recombinaison homologue dans les cellules d’insectes. Le système d’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est très apprécié dans la littérature académique. Il fait l’objet d’environ 100 citations par an depuis 2000 !
Les systèmes traditionnels de baculovirus nécessitent la purification et l’amplification d’un surnageant viral initial à faible titre. Cela nécessite un dosage sur plaque chronophage. Cependant, le vecteur pFastBac™ de Bac-to-Bac™ se recombine avec le bacmide parent dans les cellules compétentes DH10Bac™ E. coli pour former un bacmide d’expression. Transfectez le bacmide dans des cellules d’insectes pour une production rapide d’un titre élevé de particules de baculovirus recombinant pur dans la toute première transfection. Vous économiserez des semaines de temps précieux. Collectez un stock de baculovirus P2 pur au jour 10 sans devoir recourir à un dosage fastidieux de plaques (voir figure 1)
Caractéristiques techniques
| Marque | Invitrogen |
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| Réf. B-LABO | BL-RE-127813 |
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| Réf. fabricant | 10237954 |
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| Type | Système d’expression |
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| Méthode de clonage | Blunt TOPO™ |
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| Marqueur de protéine | Marqueur His (6x) |
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| Quantité | 20 réactions |
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| Contenu et stockage | <b>Kit d’expression Bac-to-Bac C-His TOPO :</b><br />• Kit de vecteur pour 20 réactions de clonage TOPO, conserver à -20°C<br /> –Vecteur pFastBac / CT-TOPO contenant le site de clivage TEV à extrémité carboxylique et marqueur His<br /> –plasmide de contrôle 1-Gus pFastBac (vecteur d’expression de contrôle)<br /> –Autres réactifs du kit : Tampon PCR 10X, mélange de dNTP, solution saline, eau stérile, matrice de PCR contrôle, amorce sens polyédrine, amorce antisens SV40 pA<br />• <i>E. coli</i> chimiquement compétentes One Shot Mach1-T1R pour 20 réactions (20 x 50 µl), conserver à -80°C<br />• <i>E. coli</i> compétentes MAX Efficiency DH10Bac pour 20 réactions (4 kits de 5 x 0,1 ml chacun), conserver à -80°C<br />• Réactif de transfection ExpiFectamine Sf (1 ml), conserver à 4°C, ne pas congeler<br /><br /> |
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| Résistance aux antibiotiques des bactéries | Ampicilline (AmpR), gentamicine (GMR) |
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| Format | Liquide |
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| Mécanisme d’expression | Expression à base de cellules |
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| Système d’expression | Baculovirus |
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| Gamme de produits | Bac-to-Bac™, TOPO™ |
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| Accélérateur | Polyédrine |
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