Kit d’analyse quantitative des protéines Thermo Scientific SILAC – RPM 1640 est utilisé pour l’analyse spécifique de l’expression des protéines par spectrométrie de masse à l’aide d’un marquage isotopique stable avec des acides aminés dans la culture cellulaire (SILAC).
Le marquage isotopique stable avec des acides aminés dans la culture cellulaire (méthode SILAC) est une méthode performante permettant d’identifier et de quantifier les changements différentiels relatifs dans les échantillons de protéines complexes. Cette approche implique l’intégration métabolique in vivo d’acides aminés “lourds” marqués 13C ou 15N dans les protéines, suivie de la spectrométrie de masse (MS) pour l’identification, la caractérisation et la quantification accélérées et complètes des protéines.
Étant donné que les peptides marqués avec des acides aminés lourds et légers sont chimiquement identiques, ils co-éluent pendant le préfractionnement de la colonne en phase inverse et sont donc détectés en même temps pendant l’analyse MS. Les intensités maximales relatives de plusieurs peptides distincts sur le plan isotopique issus de chaque protéine sont ensuite utilisées pour déterminer la variation moyenne de l’abondance des protéines dans l’échantillon traité.
Chaque kit comprend tous les réactifs nécessaires pour marquer les cellules de manière isotopique avec 13C6 L-lysine-2HCl, y compris des milieux, des acides aminés lourds et légers, et du sérum dialysé. Les dérivés lourds de la L-arginine-HCl (n° de réf. 88210, 89990) sont disponibles séparément et peuvent être associés aux kits de quantification de protéines Pierce SILAC afin d’améliorer la couverture des marqueurs isotopiques des peptides. Les kits sont compatibles avec les lignées cellulaires de mammifères adaptées pour se développer dans des milieux DMEM ou RPMI 1640. Des kits avec des formulations de milieux spécialisés sont également disponibles pour les lignées de cellules souches humaines et murines. Lorsqu’ils sont associés à des produits d’enrichissement d’échantillons de protéines/peptides Thermo Scientific, les kits de quantification de protéines Pierce SILAC permettent également d’effectuer une analyse MS des protéines à faible abondance telles que les protéines de surface, les protéines spécifiques aux organites et les modifications de protéines post-translationnelles, telles que la phosphorylation ou la glycosylation.
Recommandé dans les cas suivants : Analyse quantitative des variations relatives d’abondance des protéines à partir de différents traitements cellulaires ; Analyse quantitative des protéines pour lesquelles il n’y a pas d’anticorps disponibles ; Profilage de l’expression des protéines de cellules normales par rapport à des cellules anormales ; Identification et quantification de plusieurs centaines à plusieurs milliers de protéines dans le cadre d’une seule expérience
Caractéristiques du kit d’analyse quantitative de protéines SILAC – RPMI 1640 :
- Efficace — l’intégration de marqueurs efficaces à 100 % à des protéines de cellules vivantes
- Reproductibles : élimine la variabilité intra-expérimentale provoquée par la préparation différenciée des échantillons
- Flexible : milieu qui présente une insuffisance en L-lysine et L-arginine, qui permet une couverture protéomique plus complète par la biais d’un marquage des isotopes d’acides aminés doubles
- Compatible — marque les protéines exprimées dans une grande variété de lignées cellulaires de mammifères adaptées à la croissance en milieu RPMI 1640, notamment HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat et autres
- Suppléments de haute qualité — acides aminés lourds avec une pureté d’isotope >99 % ; FBS dialysé testé afin de s’assurer qu’il est stérile, exempt d’endotoxine, et compatible avec la culture cellulaire
