Ester Alexa Fluor™ 546 NHS (ester succinimidyle)
Alexa Fluor™ 546 est un colorant jaune vif. Utilisé en imagerie et en cytométrie de flux, le colorant Alexa Fluor™ 546 est hydrosoluble et insensible au pH de pH 4 à pH 10. En plus de formulations de colorant réactif, nous offrons le colorant Alexa Fluor™ 546 conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules (
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).
L’ester NHS (ou ester succinimidylique) de l’Alexa Fluor™ 546 est l’outil le plus populaire pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH
Colorant Alexa Fluor™ 546
Ester NHS
Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
554/570 nm
112 000 cm-1M-1
1159.6
Vous pouvez conjuguer des réactifs amino-réactifs avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). Vous pouvez adapter la taille de la réaction à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif sensible à la protéine.
L’ester NHS Alexa Fluor™ est typiquement dissolu dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité (D12345), et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1 à 0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino-epsilon de lysine, vous pouvez atteindre un marquage plus sélectif de l’extrémité de l’amine en utilisant un tampon proche du pH neutre.
Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
Kit de purification de conjugués d’anticorps pour 0,5-1 mg (
| Marque | Molecular Probes |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-129555 |
| Réf. fabricant | 11584007 |
| Quantité | 5 mg |
| Type de produit | Colorant |
| Contenu et stockage | Stocker au congélateur (-5 à -30°C) à l’abri de la lumière. |
| Réactivité chimique | Amine |
| Conditions d’expédition | Température ambiante |
| Groupement de réactifs | Ester actif, ester de succinimidyle |
| Marqueur ou colorant | Alexa Fluor™ 546 |
| Type d’étiquette | Colorants Alexa Fluor |
| Gamme de produits | Alexa Fluor™ |
| Émission | 570 nm |
| Excitation | 554 nm |
