Étiquetez les protéines intracellulaires pour la purification d’affinité avec les microbilles de streptavidine
La NHS-Desthiobiotine Thermo Scientific EZ-Link est un réactif de marquage court à membrane perméable et réactif aux amines, dont le groupe semblable à la biotine est éluable à partir de la streptavidine, ce qui le rend idéal pour le marquage et la purification des protéines intracellulaires.La NHS-Desthiobiotine est une variante de la biotine qui est activée comme ester NHS pour marquer de façon covalente les amines primaires (-NH2) des protéines ou d’autres molécules avec des groupes de desthiobiotine. Le marqueur de la desthiobiotine se lie à la streptavidine et à d’autres protéines liant la biotine à haute spécificité mais s’élue facilement avec des conditions douces (par ex., par déplacement compétitif avec la biotine stable et libre). À ce titre, ce réactif est une alternative utile à la NHS-Biotine (réf. 20217) pour les techniques d’avidine-biotine dans lesquelles l’élution non dénaturante des protéines marquées est souhaitée. Cette variété la plus simple et la plus petite de réactif à la desthiobiotine réactif à l’amine est non chargée et perméable à la membrane cellulaire ; par conséquent, la NHS-Desthiobiotine peut être utilisée avec des cellules intactes pour le marquage des protéines intracellulaires.
Desthiobiotine vs biotine :
la desthiobiotine est un analogue de la biotine sans soufre à cycle unique qui se lie à la streptavidine avec une spécificité presque égale, mais moins d’affinité que la biotine (1 / Kd = 10^11 vs 10^15 M, respectivement) [1-2]. Par conséquent, les protéines d’appât déthiobiotinylées et leurs partenaires en interaction peuvent être facilement et spécifiquement éluées de la résine d’affinité de streptavidine en utilisant des conditions douces basées sur un déplacement compétitif avec la biotine libre. Pour les expériences de dosage par extraction avec des échantillons biologiques, cette caractéristique de libération douce de la desthiobiotine permet également de minimiser la co-purification de molécules biotinylées endogènes, qui restent liées à la streptavidine lors de l’élution des complexes protéiques cibles avec la biotine libre. Le système d’affinité avidine-biotine modifié élimine également la nécessité d’utiliser des conditions d’élution difficiles qui peuvent dissocier des complexes et/ou endommager la protéine ou la cellule cible. Les techniques basées sur la desthiobiotine sont idéales lorsque vous utilisez des protéines natives ou recombinantes qui ne sont pas exprimées avec une étiquette de fusion et lorsque vous isolez des protéines capturées dans des conditions natives, telles que le ciblage de cellules intactes ou de protéines de surface cellulaire.
| Marque | Thermo Scientific |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-129579 |
| Réf. fabricant | 15285653 |
| Type de produit | NHS-Desthiobiotine |
| Quantité | 50 mg |
| Contenu et stockage | Stockage à -20°C. |
| Gamme de produits | EZ-Link™ |
| Perméabilité cellulaire | Perméant aux cellules |
| Réactivité chimique | Amine |
| Groupement de réactifs | Ester actif, ester de succinimidyle, ester NHS |
| Solubilité | DMF (diméthylformamide), DMSO (diméthylsulfoxyde) |
| Marqueur ou colorant | Analogue de la biotine |
| Entretoise | Court |
| Type d’étiquette | Biotine et analogues |
