Ester Alexa Fluor™ 680 NHS (ester succinimidyle)
Alexa Fluor™ 680 est un colorant vif et photostable proche de l’infrarouge qui est spectralement similaire au colorant Cy5.5. Utilisé pour une génération de signal stable en imagerie et en cytométrie de flux, le colorant Alexa Fluor™ 680 est hydrosoluble et insensible au pH de pH 4 à pH 10. Invisible pour l’œil humain, la fluorescence de ce colorant Alexa Fluor™ à grande longueur d’onde peut être facilement détectée par la plupart des systèmes d’imagerie. En plus des formulations de colorants réactifs, nous proposons le colorant Alexa Fluor™ 680 conjugué à une variété d’anticorps, de peptides, de protéines, de traceurs et de substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection cellulaires (
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).
L’ester NHS (ou ester succinimidylique) d’Alexa Fluor™ 680 est l’outil le plus apprécié pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH
Colorant Alexa Fluor™ 680
Ester NHS
Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
684/707 nm
183 000 cm-1M-1
Cy5.5
Vous pouvez conjuguer des réactifs réactifs aux amines avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). Vous pouvez adapter la taille de la réaction à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif sensible à la protéine.
L’ester NHS Alexa Fluor™ est typiquement dissous dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité (D12345), et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1 à 0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino-epsilon de lysine, vous pouvez atteindre un marquage plus sélectif de l’extrémité de l’amine en utilisant un tampon proche du pH neutre.
Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 0,5-1 mg (
| Marque | Molecular Probes |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-129749 |
| Réf. fabricant | 13413319 |
| Quantité | 25 mg |
| Type de produit | Colorant |
| Contenu et stockage | 1 tube<br>Conserver sous forme desséchée à -20°C, dès réception |
| Conditions d’expédition | Température ambiante |
| Gamme de produits | Alexa Fluor™ |
| Émission | 707 nm |
| Excitation | 684 nm |
