Ester Alexa Fluor™ 700 NHS (ester succinimidyle)
Alexa Fluor™ 700 est un colorant vif et photostable proche de l’IR qui peut être excité par une lampe à arc au xénon, des lasers à diode rouge lointain ou des lasers à colorant pompés fonctionnant dans la plage de 675 – 700 nm. Utilisé pour une génération de signal stable en imagerie et en cytométrie de flux, le colorant Alexa Fluor™ 700 est hydrosoluble et insensible au pH de pH 4 à pH 10. Invisible pour l’œil humain, la fluorescence de ce colorant Alexa Fluor™ à grande longueur d’onde peut être facilement détectée par la plupart des systèmes d’imagerie. En plus des formulations de colorants réactifs, nous proposons le colorant Alexa Fluor™ 700 conjugué à une variété d’anticorps, de peptides, de protéines, de traceurs, et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection cellulaires. L’ester NHS (ou succinimidyle ester) d’Alexa Fluor™ 700 est l’outil le plus populaire pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH
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) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Le conjugué Alexa Fluor™ qui en résulte présente une plus grande fluorescence et une meilleure photostabilité que les conjugués d’autres fluorophores spectralement similaires.
Colorant Alexa Fluor™ 700
Ester NHS
Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
702/723 nm
205 000 cm-1M-1
∼ 1400
Vous pouvez conjuguer des réactifs amino-réactifs avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). Vous pouvez adapter la taille de la réaction à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous vous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, à l’aide de trois rapports molaires différents entre le réactif et la protéine.
L’ester NHS Alexa Fluor™ est typiquement dissolu dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité (D12345), et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1–0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Étant donné que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino de lysine epsilon, vous pouvez obtenir un marquage plus sélectif du terminus d’amine en utilisant un tampon plus proche du pH neutre.
Les anticorps marqués sont généralement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, telle que Sephadex™ G-25, Biogel™ P-30 ou équivalent. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous proposons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugués d’anticorps :
kit de purification de conjugués d’anticorps pour 0,5 à 1 mg (
| Marque | Molecular Probes |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-129796 |
| Réf. fabricant | 10072682 |
| Quantité | 1 mg |
| Type de produit | Colorant |
| Contenu et stockage | Stocker au congélateur (-5 à -30°C) à l’abri de la lumière. |
| Réactivité chimique | Amine |
| Conditions d’expédition | Température ambiante |
| Groupement de réactifs | Ester actif, ester de succinimidyle |
| Marqueur ou colorant | Alexa Fluor™ 700 |
| Type d’étiquette | Colorants Alexa Fluor |
| Gamme de produits | Alexa Fluor™ |
| Émission | 723 nm |
| Excitation | 702 nm |
