Analogues de la diazirine de la leucine et de la méthionine pour exprimer des protéines dans la culture cellulaire qui vont réticuler leurs interacteurs protéiques lors de l’activation de la lumière UV in vivo.
Réactivité chimique
Non sélectif-NA (marquage métabolique)
Cleavable
Non
Description
L-Photo-Leucine
Poids moléculaire
143,15
Pégylé
Non
Marque
Thermo Scientific
Les acides aminés photoréactifs Thermo Scientific™ Pierce sont des analogues de la L-Leucine et de la L-Méthionine qui peuvent être incorporés dans les protéines pendant la synthèse, puis activés par la lumière pour permettre l’interaction de réticulation covalente des protéines dans les cellules.
La L-Photo-Leucine et la L-Photo-Méthionine Thermo Scientific sont des analogues des acides aminés L-Leucine et L-Méthionine qui ont des chaînes latérales activables de la diazirine capables d’établir une réticulation chimique aux molécules adjacentes lorsqu’elles sont exposées à la lumière ultraviolette. Comme leurs homologues naturels, ces acides aminés photoréactifs peuvent être incorporés de manière endogène dans la séquence primaire des protéines pendant la synthèse. Les domaines d’interaction de protéine à protéine impliquant les protéines synthétisées dans leur environnement natif peuvent alors être étroitement liés en activant les groupes de diazirines. Les expériences traditionnelles de réticulation nécessitent l’ajout de réticules chimiques bifonctionnels et de solvants de réactifs associés, ce qui peut nuire à la biologie cellulaire étudiée. L’utilisation d’acides aminés photoréactifs minimise ces effets potentiellement indésirables et permet d’étudier et de caractériser les interactions protéiques stables et transitoires dans les cellules avec un degré élevé de confiance. Lorsqu’elles sont utilisées en association avec des milieux cellulaires limitants spécialement formulés qui sont dépourvus de leucine et de méthionine, les dérivés photo-activables sont traités comme des acides aminés naturels par la machine de synthèse des protéines. Par conséquent, ils peuvent être substitués à la leucine ou à la méthionine dans la séquence primaire des protéines. Lorsqu’ils sont exposés à la lumière UV, les anneaux de diazirine deviennent des intermédiaires réactifs qui forment des liaisons covalentes avec des chaînes latérales et des structures protéiques proches. Les partenaires de liaison associés naturellement sont alors piégés instantanément. Les complexes protéiques réticulés sont détectés par une mobilité réduite sur SDS-PAGE suivie d’une détection par transfert Western, d’une chromatographie d’exclusion stérique, d’une sédimentation par gradient de densité de saccharose ou d’une spectrométrie de masse.
Points forts
Points clés
Marquage in vivo : intègre le groupe photoréactif aux protéines à l’aide d’outils cellulaires normaux
Réticulation in vivo : permet de trouver des protéines interagissant dans l’environnement cellulaire natif
Spécificité accrue par rapport aux méthodes traditionnelles : réticulation interagissant avec les protéines correctement positionnées à leurs interfaces dans les domaines d’interaction entre protéines
Complémentaire aux méthodes traditionnelles : fournit une caractérisation détaillée des interactions entre protéines par rapport aux résultats avec le formaldéhyde et d’autres approches plus générales de réticulation
Récupération efficace : 90 % de récupération de protéines dans les lysats cellulaires après réticulation
Compatible : réticule les protéines exprimées dans une grande variété de lignées cellulaires, notamment HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3 et C6
Caractéristiques techniques
Marque
Thermo Scientific
Réf. B-LABO
BL-RE-129828
Réf. fabricant
11851315
Réactivité chimique
Non sélectif-NA (marquage métabolique)
Cleavable
Non
Poids moléculaire
143,15
Pégylé
Non
Longueur du bras espaceur
0,0 Å
Contenu et stockage
Dès réception, stocker à 4°C, à l’abri de la lumière.
Perméabilité cellulaire
Oui
Conditions d’expédition
Température ambiante
Gamme de produits
Pierce™
Méthode d’étiquetage
Marquage chimique, marquage métabolique
Type d’agent de réticulation
Hétérobifonctionnel
Groupement de réactifs
Diazirine
Entretoise
Court (< 10 Å)
Forme
Pleine
Quantité
100 mg
Solubilité
Eau
Format
Étalon
Hydrosoluble
Oui
Type de produit
Réticulateur
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