Maléimide Alexa Fluor™ 532 C5
Le maléimide Alexa Fluor™ 532 C
est un colorant brillant, jaune fluorescent, avec un niveau d’excitation parfaitement adapté à la ligne laser Nd:YAG à fréquence doublée. Utilisé pour une génération de signal stable en imagerie et en cytométrie de flux, le colorant Alexa Fluor™ 532 est hydrosoluble et insensible au pH de pH 4 à pH 10. En plus des formulations de colorants réactifs, nous proposons le colorant Alexa Fluor™ 532 conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection cellulaires
Le dérivé de maléimide Alexa Fluor™ 532 est l’outil le plus utilisé pour conjuguer le colorant à un groupe thiol sur une protéine, un oligonucléotide thiophosphate ou un ligand de faible poids moléculaire. Le conjugué d’Alexa Fluor™ 532 résultant présente une fluorescence plus lumineuse et une photostabilité plus élevée que les conjugués d’autres fluorophores similaires sur le plan spectral.
colorant Alexa Fluor™ 532
maléimide
groupes thiol sur protéines et ligands, oligonucléotide thiophosphates
528/552 nm
78 000 cm-1M-1
812,88
La protéine doit être dissoute à une concentration de 50 à 100 μM dans un tampon approprié (10 à 100 mM phosphate, Tris ou HEPES), pH 7,0 à 7,5. Dans cette plage de pH, les groupes thiols de la protéine sont suffisamment nucléophiles pour réagir presque exclusivement avec le réactif en présence des groupes amines de la protéine, plus nombreux, qui sont protonés et relativement non réactifs. Nous recommandons de réduire tous les ponts disulfures à ce stade, en utilisant un agent réducteur en excès molaire (10X), comme DTT ou TCEP. L’excès de DTT doit être retiré par dialyse et la modification subséquente du groupe thiol doit être menée en l’absence d’oxygène pour prévenir la reformation des ponts disulfures ; ces précautions ne sont pas nécessaires lorsque le TCEP est utilisé avant la conjugaison de la maléimide.
La molécule d’Alexa Fluor™ maléimide est typiquement dissoute dans du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité à une concentration de 1 à 10 mM immédiatement avant emploi ; les solutions de réserve doivent être conservées à l’abri de la lumière autant que possible. Généralement, cette solution de réserve est ajoutée à la solution de protéines au goutte à goutte, en agitant, pour produire environ 10 à 20 moles de réactif par mole de protéine ; la réaction se déroule à température ambiante pendant 2 heures ou à 4°C la nuit, à l’abri de la lumière. Tout réactif qui n’a pas réagi avec le groupe thiol peut être consommé en ajoutant un excès de glutathion, mercaptoéthanol, ou d’autres molécules solubles de faible poids moléculaire dotées d’une fonction thiol.
Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 0,5 à 1 mg (A33086)
| Marque | Molecular Probes |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-129850 |
| Réf. fabricant | 10062592 |
| Quantité | 1 mg |
| Type de produit | Colorant |
| Contenu et stockage | Stocker au congélateur (-5 à -30°C) à l’abri de la lumière. |
| Réactivité chimique | Thiol |
| Conditions d’expédition | Température ambiante |
| Groupement de réactifs | Maléimide |
| Marqueur ou colorant | Alexa Fluor™ 532 |
| Type d’étiquette | Colorants Alexa Fluor |
| Gamme de produits | Alexa Fluor™ |
| Émission | 552 nm |
| Excitation | 528 nm |
