Ester NHS BODIPY™ 581/591 (ester de succinimidyle)
Le colorant BODIPY™ 581/591 est un colorant fluorescent rouge vif avec excitation et émission similaires à Rhodamine Red™ et Alexa Fluor™ 568. Il présente un coefficient d’extinction élevé et un rendement quantique de fluorescence et est relativement insensible à la polarité du solvant et au changement de pH. Contrairement aux fluorophores hautement solubles dans l’eau, le colorant Alexa Fluor™ 488 et aux colorants fluorescéine (FITC), les colorants BODIPY™ ont des propriétés hydrophobes uniques, idéales pour la coloration des lipides, des membranes et d’autres composés lipophiles. Le colorant BODIPY™ 581/591 a une durée de vie à l’état excité relativement longue (généralement 5 nanosecondes ou plus). Cela est utile pour les dosages à base de polarisation de fluorescence et une large coupe transversale à deux photons pour l’excitation multiphotonique. En plus de formulations de colorant réactif, nous offrons le colorant BODIPY™ 581/591 conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules.
L’ester NHS (ou ester succinimidylique) de BODIPY™ 581/591 est l’outil le plus apprécié pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH
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) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Les conjugués BODIPY™ 581/591 qui en résultent présentent une fluorescence vive, des bandes passantes à émission étroite et des durées de vie à l’état excité relativement longues, qui peuvent être utiles pour les dosages de polarisation de fluorescence et la microscopie par excitation à deux photons (TPE).
Colorant BODIPY™ 581/591
Ester NHS (ester succinimidylique)
Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
581/591 nm
136 000 cm-1M-1
489.28
Les réactifs réagissant aux amines peuvent être conjugués avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). La taille de la réaction peut être adaptée à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif sensible à la protéine.
L’ester NHS BODIPY™ est typiquement dissolu dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1 à 0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino-epsilon de lysine, vous pouvez atteindre un marquage plus sélectif de l’extrémité de l’amine en utilisant un tampon proche du pH neutre.
Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant BODIPY™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
Kit de purification de conjugués d’anticorps pour 0,5-1 mg (
| Marque | Molecular Probes |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-129931 |
| Réf. fabricant | 11580256 |
| Quantité | 5 mg |
| Type de produit | Colorant |
| Contenu et stockage | Stocker au congélateur (entre -5°C et -30°C) à l’abri de la lumière. |
| Réactivité chimique | Amine |
| Conditions d’expédition | Température ambiante |
| Groupement de réactifs | Ester actif, ester de succinimidyle |
| Marqueur ou colorant | BODIPY™ 581, 591 |
| Type d’étiquette | Colorants BODIPY |
| Gamme de produits | BODIPY™ |
| Émission | 591 nm |
| Excitation | 581 nm |
