Solution de clonage en une seule étape, en cinq minutes et très efficace (clonage TOPO) pour l’insertion directe de produits PCR amplifiés par polymérase Taq dans un vecteur plasmidique à des fins de séquençage.
Type de produit
Kit de clonage
Type de cellule
Chimiquement compétent
Contenu et stockage
Chaque kit de clonage TOPO™ pour séquençage contient un vecteur PCR™ 4-TOPO™ ou pCR4Blunt-TOPO™, une solution saline, des dNTPs, un modèle de contrôle et des amorces, des amorces directes T3, T7, M13 (-20) et inverses M13, des cellules d’E. coli chimiquement compétentes One Shot™ ou Electrocomp™, un milieu S.O.C. et du plasmide de contrôle pUC19. Stockez les cellules d’E. coli One Shot™ à -80°C. Conserver tous les autres composants à -20°C. La stabilité de tous les réactifs est garantie pendant 6 mois, sous réserve d’une bonne conservation.
Souche bactérienne ou de levures
TOP10
Méthode de clonage
TOPO™-TA
Marque
Invitrogen
Ces kits incluent tout ce dont vous avez besoin pour cloner et sélectionner les vecteurs recombinants contenant le fragment de PCR de votre choix. Chaque kit utilise le vecteur pCR4-TOPO TA avec des sites d’amorce de séquençage spécifiquement conçus, qui permettent, pour chaque réaction, d’augmenter la séquence d’insert et de réduire celle de vecteur. Selon vos besoins et votre budget, ces kits peuvent comporter tout un éventail de cellules compétentes, ou aucune de ces cellules. Kits de séquençage TOPO TA Cloning : présentationVecteur : vecteur TA pCR4-TOPO : vecteur de clonage optimisé pour des résultats de séquençage améliorésMéthode de clonage : TOPO TA Cloning : Topoisomérase I, ligature en 5 minutes des produits PCR avec saillies de 3’A (amplification Taq) sur le vecteurCellules compétentes : Choix de kits : kits généraux, hautement efficaces, à cellules résistantes au T1 bactériophages, ou à cellules compétentes à fort taux de croissance, ou kits propres à vos applicationsVecteur TA pCR4-TOPO : Optimisé pour le séquençageNous avons éliminé la majeure partie du site de clonage multiple du vecteur TA pCR4- TOPO pour raccourcir la distance entre les sites d’amorce de séquençage et le site d’insertion à une valeur aussi faible que 33 bp. Résultat : les réactions de séquençage diminuent la séquence de vecteur et augmentent celle de l’insertion. Le vecteur TA pCR4-TOPO comprend des sites pour 4 amorces de séquençage communes : M13 direct, M13 inverse, T7 et T3. Les kits incluent une aliquote de chaque.Sélection et manipulation de clones TA pCR4-TOPOLe vecteur TA pCR4-TOPO contient à la fois des Marquages de résistance à l’ampicilline et à la kanamycine et une fusion de gènes LacZα-ccdB pour une sélection positive et une sélection bleu/blanc. Le site de clonage multiple minimisé du vecteur inclut toujours des sites EcoRI de flanquement pour l’excision simplifiée des produits de PCR clonés et un site Sse8387I unique pour la génération des suppressions imbriquées avant le séquençage. Les promoteurs T7 et T3 sont également présents pour la transcription in vitro.Clonage simplifié basé sur TOPOGrâce à la technologie de clonage TOPO, il n’est pas nécessaire d’utiliser des amorces pour PCR contenant des séquences spécifiques ou des procédures post-PCR, de préparer les vecteurs ni d’effectuer d’autres étapes de manipulation longues d’ADN. Il suffit d’ajouter votre réaction PCR directement dans le vecteur chargé en topoisomérase, d’incuber pendant 5 minutes et de la transformer avec les cellules compétentes E. coli fournies.Clonage efficaceAvec jusqu’à 95 % de clones porteurs de l’insert désiré, vous n’avez plus besoin d’analyser autant de clones, ce qui vous permet de gagner du temps et de l’argent. Le vecteur TA pCR4-TOPO utilisé dans ce kit est livré avec des saillies de 3’T pour une ligature efficace des produits PCR amplifiés Taq, qui contiennent des saillies de 3’A.La norme du clonageEn matière de clonage, la technologie de clonage TOPO™ est un partenaire fiable pour des milliers de scientifiques depuis plus de dix ans. Rapide, simple à utiliser et efficace, le clonage TOPO™ a été appliqué à de nombreux vecteurs différents pour un large éventail d’applications.Kits de séquençage TOPO TA Cloning : options de kitLe kit de séquençage TOPO TA Cloning peut être acheté avec une diverses cellules compétentes offrant différents avantages selon vos besoins :
Une version du kit qui inclut un kit de minipréparation d’ADN plasmidique rapide PureLink™ (No de catalogue K4575-02) à utiliser pour l’isolement de plasmide recombinant propre et prêt pour le séquençage est également disponible.
Biologie de la chromatine, immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), clonage, analyse de la méthylation, clonage PCR, ARNi, recherche sur l’épigénétique et l’ARN non codant, séquençage de l’ADN traité par bisulfite
Caractéristiques principales
Clonage général : TOP10 (No de catalogue K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
Clonage haute efficacité : Cellules ™ TOP10 Electrocomp (No de catalogue K4580-01, K4580-40)
Clonage général, résistance aux bactériophages T1 : DH5α-T1R (No de catalogue K4595-01, K4595-40)
Croissance rapide : Mach1™-T1R chimiquement compétente E. Coli (No de catalogue K4530-20)
Fournissez le vôtre : pour plus de souplesse et économiser de l’argent (No de catalogue 450030)
Obtenez plus de séquence : permet d’augmenter la séquence d’insert et de réduire la séquence de vecteur lors de l’utilisation d’amorces de séquençage standard
Rapide et simple : seulement trois étapes, réalisées en 5 minutes à peine, séparent le clonage de la PCR
Efficace : obtenez jusqu’à 95 % de clones avec le bon insert
Résultats prouvés : performances fiables pendant plus d’une décennie avec plus de 4 000 citations
Caractéristiques techniques
Marque
Invitrogen
Réf. B-LABO
BL-RE-130532
Réf. fabricant
10073082
Type de produit
Kit de clonage
Type de cellule
Chimiquement compétent
Contenu et stockage
Chaque kit de clonage TOPO™ pour séquençage contient un vecteur PCR™ 4-TOPO™ ou pCR4Blunt-TOPO™, une solution saline, des dNTPs, un modèle de contrôle et des amorces, des amorces directes T3, T7, M13 (-20) et inverses M13, des cellules d’E. coli chimiquement compétentes One Shot™ ou Electrocomp™, un milieu S.O.C. et du plasmide de contrôle pUC19. Stockez les cellules d’E. coli One Shot™ à -80°C. Conserver tous les autres composants à -20°C. La stabilité de tous les réactifs est garantie pendant 6 mois, sous réserve d’une bonne conservation.
