L’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est une méthode efficace pour produire du baculovirus pour l’expression de protéines de haut niveau dans les cellules d’insectes. Elle repose sur la génération de virus recombinant par transposition spécifique au site dans l’E. coli plutôt que sur la recombinaison homologue dans les cellules d’insectes. Nouveau : vecteurs pFastBacTOPO™ !
Expression fiable et rapide des protéines
Le système d’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est plus rapide et plus facile que l’expression traditionnelle du baculovirus. De plus, il maintient des niveaux élevés d’expression des protéines. Le Bac-to-Bac™ repose sur la génération de baculovirus recombinant par transposition spécifique au site dans l’E. coli plutôt que sur la recombinaison homologue dans les cellules d’insectes. Le système d’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est très apprécié dans la littérature académique. Il fait l’objet d’environ 100 citations par an depuis 2000 !
Les systèmes traditionnels de baculovirus nécessitent la purification et l’amplification d’un surnageant viral initial à faible titre. Cela nécessite un dosage sur plaque chronophage. Cependant, le vecteur pFastBac™ de Bac-to-Bac™ se recombine avec le bacmide parent dans les cellules compétentes E. coli DH10Bac™ pour former un bacmide d’expression. Transfectez le bacmide dans des cellules d’insectes pour une production rapide d’un titre élevé de particules de baculovirus recombinant pur dans la toute première transfection. Vous économiserez des semaines de temps précieux. Collectez un stock pur de baculovirus P2 le jour 10 sans la nécessité d’un dosage fastidieux de plaques (voir la Figure 1)
Caractéristiques techniques
| Marque | Invitrogen |
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| Réf. B-LABO | BL-RE-151883 |
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| Réf. fabricant | 10105564 |
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| Type | Système d’expression |
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| Méthode de clonage | Blunt TOPO™ |
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| Marqueur de protéine | “Tag” His (6x) |
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| Quantité | 20 réactions |
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| Contenu et stockage | <b>Bac-to-Bac N-His TOPO Expression Kit:</b><br>• Vector kit for 20 TOPO cloning reactions, store at -20°C<br> –pFastBac/NT-TOPO vector containing N-terminal His-tag and TEV cleavage site<br> –pFastBac 1-Gus control plasmid (control expression vector)<br> –Other kit reagents: 10X PCR, dNTP mix, Salt solution, sterile water, control PCR template, polyhedrin forward primer, SV40 pA reverse primer<br>• One Shot Mach1-T1R Chemically Competent <i>E. coli</i> for 20 reactions (20 x 50 μL), store at -80°C<br>• MAX Efficiency DH10Bac Competent <i>E. coli</i> for 20 reactions (4 kits with 5 x 0.1 mL each), store at -80°C<br>• ExpiFectamine Sf Transfection Reagent (1 mL), store at 4°C, do not freeze<br><br> |
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| Résistance aux antibiotiques des bactéries | Ampicilline (AmpR), gentamicine (GMR) |
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| Format | Liquide |
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| Mécanisme d’expression | Expression à base de cellules |
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| Système d’expression | Baculovirus |
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| Gamme de produits | Bac-to-Bac™, TOPO™ |
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| Accélérateur | Polyédrine |
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