Ester NHS Alexa Fluor™ 514 (ester de succinimidyle)
Alexa Fluor™ 514 est un colorant vert brillant et fluorescent. Utilisé pour une génération de signal stable en imagerie et en cytométrie en flux, le colorant Alexa Fluor™ 514 est hydrosoluble et insensible au pH de pH 4 à pH 10. En plus de formulations de colorants réactifs, nous proposons le colorant Alexa Fluor™ 514 conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules.
L’ester NHS (ou ester succinimidylique) de l’Alexa Fluor™ 514 est l’outil le plus populaire pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH
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) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Le conjugué Alexa Fluor™ résultant présentera une fluorescence plus lumineuse et une photostabilité plus élevée que les conjugués d’autres fluorophores similaires sur le plan spectral.
Colorant Alexa Fluor™ 514
Esters NHS
Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
517 / 542 nm
80 000 cm-1M-2
Vous pouvez conjuguer des réactifs amino-réactifs avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). Vous pouvez adapter la taille de la réaction à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg / ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif sensible à la protéine.
L’ester NHS Alexa Fluor™ est typiquement dissous dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité (D12345), et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1 à 0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino-epsilon de lysine, vous pouvez atteindre un marquage plus sélectif de l’extrémité de l’amine en utilisant un tampon proche du pH neutre.
Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 0,5 à 1 mg (A33086)
Nous proposons une large sélection de kits de marquage d’anticorps et de protéines Molecular Probes™ pour convenir à votre produit de départ et à votre configuration expérimentale. Consultez nos kits de marquage d’anticorps ou utilisez notre Outil de sélection de chimie de marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits de marquage, lisez
Kits pour le marquage de protéines et d’acides nucléiques
| Marque | Molecular Probes |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-152230 |
| Réf. fabricant | 10454372 |
| Quantité | 1 mg |
| Type de produit | Colorant |
| Contenu et stockage | Stocker au congélateur (-5 à -30°C) à l’abri de la lumière. |
| Réactivité chimique | Amine |
| Conditions d’expédition | Température ambiante |
| Groupement de réactifs | Ester actif, ester de succinimidyle |
| Marqueur ou colorant | Alexa Fluor™ 514 |
| Type d’étiquette | Colorants Alexa Fluor |
| Gamme de produits | Alexa Fluor™ |
| Émission | 542 nm |
| Excitation | 517 nm |
