Ester NHS (ester succinimidylique) BODIPY™ 650 / 665-X
Le colorant BODIPY™ 650 / 665-X est un colorant rouge lointain brillant et fluorescent avec des spectres d’excitation et d’émission similaires à Cy5 ou Alexa Fluor™ 647. Il présente un coefficient d’extinction élevé et un rendement quantique de fluorescence et est relativement insensible à la polarité du solvant et au changement de pH. Contrairement aux fluorophores hautement solubles dans l’eau, le colorant Alexa Fluor™ 488 et la fluorescéine (FITC), les colorants BODIPY™ ont des propriétés hydrophobes uniques, idéales pour la coloration des lipides, des membranes et d’autres composés lipophiles. Le colorant BODIPY™ 650 / 665-X a une durée de vie à l’état excité relativement longue (généralement 5 nanosecondes ou plus). Ceci est utile pour les dosages à base de polarisation de fluorescence et une large coupe transversale à deux photons pour l’excitation multiphotonique. En plus de formulations de colorant réactif, nous proposons le colorant BODIPY™ 650/665-X conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules.
L’ester NHS (ou ester succinimidylique) de BODIPY™ 650/665-X est l’outil le plus apprécié pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH
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) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Les conjugués BODIPY™ 650 / 665-X qui en résultent présentent une fluorescence brillante, des bandes passantes à émission étroite et des durées de vie à l’état excité relativement longues qui peuvent être utiles pour les dosages de polarisation de fluorescence et la microscopie par excitation à deux photons (TPE).
Colorant BODIPY™ 650 / 665-X
Ester NHS (ester de succinimidyle)
Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
646 / 660 nm
102 000 cm-1M-1
643,45
Les réactifs amino-réactifs peuvent être conjugués avec pratiquement n’importe quel(le) protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). La taille de la réaction peut être adaptée à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif sensible à la protéine.
L’ester NHS BODIPY™ est typiquement dissous dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité, et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1 à 0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino-epsilon de lysine, vous pouvez atteindre un marquage plus sélectif de l’extrémité de l’amine en utilisant un tampon proche du pH neutre.
Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant BODIPY™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 0,5 à 1 mg (
| Marque | Molecular Probes |
|---|---|
| Réf. B-LABO | BL-RE-152267 |
| Réf. fabricant | 11590176 |
| Quantité | 5 mg |
| Type de produit | Colorant |
| Contenu et stockage | Stocker au congélateur (-5 à -30°C) à l’abri de la lumière. |
| Réactivité chimique | Amine |
| Conditions d’expédition | Température ambiante |
| Groupement de réactifs | Ester actif, ester de succinimidyle |
| Marqueur ou colorant | BODIPY™ 650 ⁄ 665 |
| Type d’étiquette | Colorants BODIPY |
| Gamme de produits | BODIPY™ |
| Émission | 660 nm |
| Excitation | 646 nm |
