Les kits de biotinylation en phase solide maléimide EZ-Link Thermo Scientific™ offrent une approche sur colonne de la biotinylation des anticorps ciblés par les sulfhydryles qui permet un meilleur contrôle de la réaction de marquage et du processus de nettoyage.
Ce système innovant de marquage d’anticorps utilise l’agarose chélatée au nickel pour immobiliser temporairement les molécules d’anticorps via leurs régions Fc riches en histidine. Une fois qu’il est maintenu en place sur la résine, l’anticorps peut être légèrement réduit à la région de charnière pour produire des sulfhydryles libres qui sont ensuite biotinylés avec le réactif maléimide-PEG2-biotine. Les réactifs de marquage excessifs et les sous-produits sont ensuite lavés avant de récupérer l’anticorps marqué et purifié de la résine à l’aide d’une solution d’imidazole légère. Aucune filtration sur gel ou dialyse n’est nécessaire. Des kits pour des réactions à petite échelle (anticorps de 0,1 à 1 mg) et des échelles plus importantes (anticorps de 1 à 10 mg) sont proposés.
Points forts
Points clés
Marquage et purification rapides — l’ensemble de la procédure ne prend qu’environ deux heures
Élimination facile de la dépense et de l’excès du réactif de marquage — il suffit de laver les sous-produits de réaction ; pas besoin de dialyse ou de filtration sur gel
Détails du produit
Les kits de biotinylation en phase solide EZ-Link utilisent une stratégie innovante pour la biotinylation des anticorps qui simplifie le processus à bien des points de vue, ce qui rend possible la biotinylation réussie pour le novice et l’expert. La stratégie consiste à immobiliser l’anticorps dans un support d’affinité pour chélate de métal et à effectuer la biotinylation en phase solide. Les anticorps se lient facilement aux supports pour chélate de métal, tels que le nickel ou le cobalt, se liant principalement à la région Fc des anticorps de classe IgG riche en histidine. Cette fonction permet d’effectuer facilement la chimie de dérivation pendant que l’anticorps est lié au support. Cette stratégie facilite l’acheminement et l’élimination des réactifs usés. L’anticorps modifié qui en résulte est ensuite retiré de manière sélective du support par élution avec une solution d’imidazole tamponnée. L’approche en phase solide de la biotinylation des anticorps permet de mieux contrôler la réaction. Par exemple : Les rapports de réactifs et d’anticorps et les temps de réaction peuvent être ajustés pour obtenir le degré approprié de biotinylation pour l’application prévue. Les kits contiennent un réactif de sulfhydryle soluble dans l’eau spécifique au groupe (maléimide-PEG2-biotine) qui cible les groupes sulfhydryle (-SH) accessibles à la surface de l’anticorps. Le format peut être appliqué au niveau d’anticorps de micro-milligramme dans le kit de colonnes de 1 ml (réf. 21920) ou à des niveaux d’anticorps de microgramme faibles pour les biotinylations à l’aide du kit de colonnes mini-spin (réf. 21930).
Caractéristiques techniques
| Marque | Thermo Scientific |
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| Réf. B-LABO | BL-RE-152314 |
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| Réf. fabricant | 10570614 |
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| Type de produit | Kit de biotinylation |
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| Quantité | 8 reactions |
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| Contenu et stockage | Suffisant pour : 8 réactions de marquage, chacune avec 0,1 à 1 mg d’anticorps<br>• Colonnes de centrifugation Ni-NTA, 0,2 ml, 8 colonnes<br>• Boîte de TBS (produisant 500 ml), 1 boîte<br>• Maléimide-PEG2-biotine, 8 x 2 mg<br>• Solution mère d’imidazole (4M), 5 ml<br>• Tubes de prélèvement (2 ml), 30 tubes<br><br>Conserver à 4°C |
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| Balance d’étiquetage | 0,5 à 1 mg |
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| Gamme de produits | EZ-Link™ |
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| Marqueur ou colorant | Biotine |
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| Entretoise | Pégylé |
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| Labeling Target | IgG |
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