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Grâce à ce système extrêmement robuste et sensible, identifiez et caractérisez les interactions de liaison protéine-ADN par l’EMSA.
Le kit EMSA chimiluminescent Thermo Scientific™ LightShift est un système exceptionnellement robuste et sensible. Il permet de réaliser des analyses de mobilité électrophorétique (EMSA) pour identifier et caractériser les interactions de liaison des protéines à l’ADN.
Le kit comprend des réactifs pour paramétrer et personnaliser les réactions de liaison à l’ADN, un ensemble de contrôles de l’extrait d’ADN et de protéines pour tester le système du kit, le conjugué streptavidine-HRP stabilisé pour vérifier la cible biotinylée d’ADN et un module de substrat chimiluminescent extrêmement sensible à des fins de détection. Le principe de la détection EMSA LightShift™ est semblable à celui d’un transfert Western. L’ADN en duplex marqué aux extrémités par la biotine est incubé avec un extrait nucléaire ou un facteur purifié et soumis à l’électrophorèse sur un gel natif. L’ADN est ensuite transféré rapidement (30 minutes) vers une membrane de nylon positive, réticulé aux UV, analysé avec le conjugué streptavidine-HRP et incubé avec le substrat. Du marquage jusqu’aux résultats, le protocole peut être terminé en un jour. Pour effectuer ce dosage, il suffit de se procurer une cible d’ADN purifié et marqué aux extrémités par la biotine, un extrait de protéine à tester, une membrane de nylon et des équipements d’électrophorèse de base. Les cibles d’ADN peuvent être synthétisées avec des marqueurs de biotine 5’ ou 3’ ou encore marquées après la synthèse à l’aide du kit Thermo Scientific de marquage d’ADN à la biotine sur l’extrémité 3’ (réf. 89818). Plusieurs méthodes permettent d’obtenir des extraits protéiques de cellules nucléaires, cytosoliques ou entières. Parmi ces méthodes, citons le kit de réactif d’extraction nucléaire et cytoplasmique Thermo Scientific NE-PER (réf. 78833).Points clés :
Doser : Dosage EMSA
Contenu et stockage : Suffisant pour : 100 réactions de liaison
• Tampon de liaison 10X, 1 ml
• ADN de contrôle Biotine-EBNA, 50 µl
• ADN EBNA non marqué 50 µl
• Extrait EBNA, 125 µl
• Poly (dl·dC), 125 µl
• Glycérol 50 %, 500 µl
• NP-40 1 %, 500 µl
• KCl à 1 M, 1 ml
• MgCl2 100 mM, 500 µl
• EDTA 200 mM pH 8,0, 500µl
• Tampon de chargement 5X, 1 ml
, à conserver à -20°C.
Format : Kit
Comprend : Tampon de liaison 10X (1 ml), ADN de contrôle Biotin-EBNA (50 µl), ADN EBNA non marqué (50 µl), extrait EBNA (125 µl), poly dl·dC (125 µl), glycérol à 50 % (500 µl), 1 % de NP-40 (500 µl), 1 M de KCl (1 ml), 100 mM de MgCl2 (500 µl), 200 mM d’EDTA pH 8,0 (500 µl), tampon de charge 5X (1 ml)
À utiliser avec (équipement) : Système d’imagerie myECL™, film radiographique
Gamme de produits : LightShift™
Type de produit : Kit d’optimisation et de contrôle EMSA LightShift
Quantité : 100 réactions
Spécificité cible : Non spécifique à la cible
Technique : Retard sur gel
