Offre une stratégie de clonage rapide en une étape permettant d’insérer directement des produits de PCR amplifiés par A Taq dans un vecteur plasmide
Souche bactérienne ou de levures
INVαF ́
Type de cellule
E. coli chimiquement compétentes
Méthode de clonage
TA Cloning
Contenu et stockage
Ce kit contient un vecteur pCR™II linéarisé, une ligase d’ADN ExpressLink™ T4, 5 tampons de ligature d’ADN ExpressLink™ T4, des dNTP, 10 tampons PCR, de l’eau stérile et des témoins. Les kits cellulaires compétents contiennent des cellules d’E. coli chimiquement compétentes One Shot™, un milieu S.O.C. et un plasmide de contrôle superenroulé.
Conserver les cellules E. coli One Shot™ à -80°C. Conserver tous les autres composants à -20°C. La stabilité de tous les réactifs est garantie pendant 6 mois, sous réserve d’une bonne conservation.
Format
Kit
Marque
Invitrogen
Les promoteurs T7 et Sp6 du vecteur pCR II permettent une transcription in vitro de l’insert en vue de générer des produits de type sens et antisens. Le kit TA Cloning Dual Promoter s’appuie sur le vecteur de clonage pCRII et la ligase d’ADN ExpressLink T4 de façon à générer, à température ambiante et en quinze minutes, un produit de ligature. Les réactions permettent généralement d’obtenir > 80 % de produits recombinants comportant des inserts.
Clonage, clonage par PCR
Caractéristiques principales
Rapide et pratique : 15 minutes, ligature à température ambiante
Efficacité : analyse des bleus / blancs et > 80 % de clones avec insert correct
Flexibilité : résistance à la kanamycine ou à l’ampicilline, offrant ainsi le choix de l’antibiotique souhaité
Simplicité : élimination de toute modification enzymatique du produit PCR
Simplification : aucune amorce de PCR associée à des sites de restriction nécessaire
Saillies 3’-T pour la ligature directe de produits PCR amplifiés par Taq
Accélérateurs de T7 et Sp6 pour la transcription et le séquençage in vitro de l’ARN
Lieur multisite flexible avec sites EcoR I de flanquement pour faciliter l’excision des inserts
Sites d’amorce M13 directs et inversés pour le séquençage
Fonctionnement du TA Cloning\
L’activité dissociée de tout modèle de la polymérase Taq confère une désoxyadénosine (A) unique aux extrémités 3’ des produits de PCR.
Le vecteur linéarisé fourni dans ce kit comporte des résidus de désoxythymidine 3’ (T) simple.
Ceci permet aux inserts de PCR de se ligaturer de façon efficace avec le vecteur.
Configurations du kit
Le kit TA Cloning est proposé dans différentes configurations : avec des cellules chimiquement compétentes INVF’ E. coli One Shot (K2050-01 et K2050-40), des cellules chimiquement compétentes TOP10F’ E. coli One Shot (K2060-01 et K2060-40), et sans des cellules chimiquement compétentes (K2750-20 et K2750-40), dans des configurations à 20 ou 40 réactions.
Caractéristiques techniques
Marque
Invitrogen
Réf. B-LABO
BL-RE-161993
Réf. fabricant
10003102
Souche bactérienne ou de levures
INVαF ́
Type de cellule
E. coli chimiquement compétentes
Méthode de clonage
TA Cloning
Contenu et stockage
Ce kit contient un vecteur pCR™II linéarisé, une ligase d’ADN ExpressLink™ T4, 5 tampons de ligature d’ADN ExpressLink™ T4, des dNTP, 10 tampons PCR, de l’eau stérile et des témoins. Les kits cellulaires compétents contiennent des cellules d’<i>E. coli</i> chimiquement compétentes One Shot™, un milieu S.O.C. et un plasmide de contrôle superenroulé.<br><br> Conserver les cellules <i>E. coli</i> One Shot™ à -80°C. Conserver tous les autres composants à -20°C. La stabilité de tous les réactifs est garantie pendant 6 mois, sous réserve d’une bonne conservation.
Format
Kit
À utiliser avec (application)
Clonage PCR
Comprend
Vecteur pCRII linéarisé, ligase d’ADN ExpressLink T4, 5 tampons de ligature d’ADN ExpressLink T4, dNTP, 10 tampons PCR, eau stérile, témoins, cellules <i>E. coli</i> chimiquement compétentes One Shot™INVαF’, milieu S.O.C. et plasmide témoin superenroulé.
