Le kit utilise le vecteur pCR™-XL-2-TOPO linéarisé et activé par topoisomérase 1, qui est compatible avec le clonage des fragments de PCR à extrémité arrondie. L’amplification de longs fragments de PCR est activée par le Master Mix Platinum™ SuperFi™ Green PCR, inclus dans le kit. L’activation de la topoisomérase I du vecteur permet aux produits PCR d’être ligaturés en seulement 5 minutes sur la paillaisse–top, et se traduit par une efficacité de clonage élevée (jusqu’à 90 % de recombinants positifs avec des fragments de 10 kb).
Le vecteur pCR-XL-2-TOPO comprend :
- Gène ccdB pour une sélection positive
- Site EcoR I encadrant le site d’insertion du produit de PCR, pour une excision simple des inserts
- Gènes de résistance à l’ampicilline et à la kanamycine permettant de choisir la méthode de sélection d’E. coli
- Site promoteur / amorce T7 pour la transcription et le séquençage de l’ARN in vitro
- Sites d’amorce T7, T3 et M13 sens et antisens pour le séquençage
Le kit complet de clonage par PCR TOPO XL-2 comprend :
- Kits de clonage par PCR TOPO XL-2 contenant le vecteur pCR-XL-2-TOPO
- Master Mix pour PCR Platine SuperFi Green : doté d’une ADN polymérase à activité correctrice (fidélité > 100X par rapport à Taq) à haute processivité et d’un gradient de densité pour générer des amplicons PCR longs et précis prêts pour chargement sur gel d’agarose pour l’extraction sur gel
- Kit mixte d’extraction rapide sur gel et de purification PCR PureLink™ : conçu pour purifier les fragments d’ADN à partir de gels d’agarose ou de PCR sens à l’aide d’une cartouche de centrifugation à base de silice en un temps < 30 minutes
- Cellules E. coli One Shot™ OmniMAX™ 2 T1R chimiquement compétentes : une lignée cellulaire chimiquement compétente améliorée, idéale pour toutes les applications de clonage.
