Ce jeu d’oligonucléotides est conçu pour la réaction de transcription inverse par changement de matrice (template switching) et la préamplification de l’ADNc obtenu. L’oligonucléotide de changement de matrice (TSO) et l’oligo(dT) de capture sont utilisés lors de la synthèse de l’ADNc pour incorporer des séquences adaptatrices aux deux extrémités de l’ADNc pleine longueur. L’amorce de préamplification est complémentaire de la séquence adaptatrice et permet l’amplification par PCR de l’ADNc obtenu.
L’oligonucléotide de changement de matrice (TSO) et l’amorce oligo(dT) de capture sont conçus pour la réaction de transcription inverse par changement de matrice. L’oligonucléotide de capture contenant l’oligo(dT) et les séquences adaptatrices sert d’amorce pour la synthèse sélective du premier brin d’ADNc à partir d’ARN polyadénylés. Lorsque la transcriptase inverse atteint l’extrémité 5ʹ de la matrice d’ARN, son activité désoxynucléotidyl transférase terminale (TdT) ajoute 1–3 nucléotides supplémentaires à l’extrémité de l’ADNc, permettant l’hybridation de l’oligo de changement de matrice et l’incorporation sans ligation de la séquence adaptatrice à l’extrémité 3ʹ de l’ADNc obtenu. Les deux oligos sont fournis en solutions concentrées 20X prêtes à l’emploi. Pour une efficacité maximale du changement de matrice, nous recommandons d’utiliser le Template Switching Oligo et l’amorce oligo(dT) de capture avec l’Invitrogen SuperScript IV Template Switching RT Master Mix . Les séquences adaptatrices incorporées aux deux extrémités de l’ADNc peuvent servir de sites de fixation d’amorces lors de l’étape d’amplification PCR suivante, permettant une préamplification globale des matrices pleine longueur. Pour la PCR, utilisez l’amorce de préamplification, complémentaire de la séquence adaptatrice du TSO et de l’oligo(dT) de capture, fournie en solution concentrée 100X prête à l’emploi. Les amorces TSO, oligo(dT) de capture et de préamplification sont également disponibles dans le kit complet Invitrogen SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp Kit (réf. 11752048) . Applications • Synthèse d’ADNc • Préamplification d’ADNc • RNA-seq • RACE
Caractéristiques techniques
| Marque | Invitrogen |
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| Réf. B-LABO | BL-EQ-071646 |
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| Réf. fabricant | 18044110 |
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| Contenu et stockage | Amorce de préamplification, 48 μL<br /><br />Conserver entre -25°C et -15°C. |
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| Concentration | 100X |
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| Marqueur ou colorant | Non |
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| Quantité | 48 réactions |
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| Couleur | Colorless |
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| À utiliser avec (application) | cDNA preamplification |
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