Il provoque une réaction de clonage en 5 minutes extrêmement efficace pour l’insertion directe de produits PCR amplifiés par polymérase et à extrémités franches dans un vecteur du plasmide pour le séquençage
Il utilise le vecteur pCR4Blunt-TOPO™ avec des sites d’amorce de séquençage spécifiquement conçus, qui permettent, pour chaque réaction, d’augmenter la séquence d’insertion et de réduire la séquence de vecteur. Les outils nécessaires pour cloner et sélectionner les vecteurs recombinants contenant le fragment de PCR de votre choix sont inclus. Résistant à l’ampicilline (AmpR) et à la kanamycine (KanR).
Vecteur pCR4Blunt-TOPO : Optimisé pour le séquençage
Le vecteur pCR4Blunt-TOPO possède un site de clonage multiple minimisé et, par conséquent, une distance plus courte entre les sites d’amorce de séquençage et le site d’insert (seulement 33 bp). Les réactions de séquençage produisent ainsi moins de séquence de vecteur et plus de séquence d’insert. Le vecteur TOPO pCR4Blunt comprend des sites pour quatre amorces de séquençage communes : M13 direct, M13 inverse, T7 et T3. Les kits incluent une aliquote de chaque.
Sélection et manipulation de clone pCR4Blunt-TOPO
Le vecteur pCR4Blunt-TOPO contient à la fois des Marquages de résistance à l’ampicilline et à la kanamycine et une fusion de gènes LacZα-ccdB pour une sélection positive et un sélection bleu/blanc. Le site de clonage multiple minimisé du vecteur inclut toujours des sites EcoR I de flanquement pour l’excision simplifiée de produits de PCR clonés ainsi qu’un site Sse8387I unique pour la génération des suppressions imbriquées avant le séquençage. Les promoteurs T7 et T3 sont également présents pour la transcription in vitro.
Clonage simplifié basé sur TOPO
Grâce à la technologie de clonage TOPO, il n’est pas nécessaire d’utiliser des amorces pour PCR contenant des séquences spécifiques ou des procédures post-PCR, de préparer les vecteurs, ni d’effectuer d’autres étapes de manipulation longues d’ADN. Il suffit d’ajouter votre réaction PCR directement dans le vecteur chargé en topoisomérase fourni, d’incuber 5 minutes et de transformer les cellules compétentes E. coli.
Clonage efficace
Avec jusqu’à 95 % de clones porteurs de l’insert désiré, il vous suffit d’analyser moins de clones, ce qui vous permet de gagner du temps et de l’argent. Le vecteur pCR4Blunt-TOPO n’a pas de saillie pour la ligature efficace des produits PCR créés par des polymérases thermostables à activité corrective qui laissent des produits PCR aux extrémités franches.
Le kit de clonage le plus largement utilisé
En matière de clonage, la technologie de clonage TOPO est un partenaire fiable pour des milliers de scientifiques depuis plus de dix ans. Rapide, simple d’utilisation et efficace, le clonage TOPO a été appliqué à de nombreux vecteurs différents pour un large éventail d’applications.
Options de kit : Les kits de clonage par PCR Zero Blunt TOPO pour séquençage
Les kits de clonage par PCR Zero Blunt TOPO pour séquençage peuvent s’acheter avec une variété de cellules compétentes qui offrent différents avantages selon vos besoins :
Clonage, clonage par PCR
Conditions d’expédition : Glace carbonique
