Un outil polyvalent et efficace pour réaliser des mutations ponctuelles, des insertions ou des suppressions dans tous les types d’ADN plasmide. Grâce à ce kit, le plasmide complet est amplifié à l’aide d’amorces phosphorylatées qui introduisent les changements souhaités.
Type de cellule
DH10B
Contenu et stockage
Boîte 1 • 10 cellules compétentes DH10B, 100 µl • d’ADN pUC19, 50 µl, 100 pg / µl • de milieu S.O.C., 5 ml Conserver à -80°C.
Boîte 2 • ADN polymérase Phire Hot Start II, 10 µl, 2 U / µl • tampon HF Phusion (5X), 1,5 ml • mélange dNTP, 10 mM chacun, 20 µl • FastDigest DpnI, 20 µl • plasmide de contrôle (dans un tampon TE), 5 ng / µl • mélange d’amorces de contrôle (25 μM chacun, amorces phosphorylatées 5’), 20 µl • ligase ADN T4, 15 µl • tampon de ligation rapide (5X), 200 µl Conserver à -20°C.
Format
Kit
Type d’échantillon
Produits de PCR
Efficacité
≥ 1 x 10^9
Marque
Thermo Scientific
Caractéristiques principales
Cette solution comprend un kit de mutagénèse dirigée Phusion et des cellules compétentes DH10B optimisées pour être utilisées avec le kit.
Kit de mutagénèse dirigée Phusion :Grâce à ce kit, le plasmide complet est amplifié à l’aide d’amorces phosphorylatées qui introduisent les changements souhaités.Le produit PCR linéaire amplifié, contenant la mutation souhaitée, est circularisé par ligation rapide (5 minutes) à l’aide de la ligase d’ADN T4. Le plasmide résultant peut ensuite être transformé dans les cellules E. coli. Il est recommandé d’utiliser les cellules compétentes DH10B avec le kit.La température d’hybridation optimale pour les ADN polymérases Phusion peut différer significativement de celle des polymérases à base de Taq. Pour obtenir des résultats optimaux, commencez par calculer votre Tm avec précision à l’aide de notre calculatrice de Tm.Méthode d'amplification exponentielle robuste et fiableAucune exigence particulière (concernant des vecteurs spéciaux, des sites de restriction ou un état de méthylation donné) pour le plasmide cibleDestruction du modèle de départ au cours d'une étape distincte non nécessaireL’ADN polymérase haute fidélité Phusion Hot Start II réduit au maximum les mutations secondaires indésirables.Amplification des plasmides de grande taille (jusqu’à 10 kb)Grâce à la modification du démarrage à chaud, la polymérase empêche l’amplification des produits non spécifiques et la dégradation indésirable des amorces avant le premier cycle de PCR.Ligase d’ADN T4 fournie dans le kit ; aucune étape de purification nécessaire avant ou après la ligation
Grâce à ce kit, le plasmide complet est amplifié à l’aide d’amorces phosphorylatées qui introduisent les changements souhaités.
Le produit PCR linéaire amplifié, contenant la mutation souhaitée, est circularisé par ligation rapide (5 minutes) à l’aide de la ligase d’ADN T4. Le plasmide résultant peut ensuite être transformé dans les cellules E. coli. Il est recommandé d’utiliser les cellules compétentes DH10B avec le kit.
La température d’hybridation optimale pour les ADN polymérases Phusion peut différer significativement de celle des polymérases à base de Taq. Pour obtenir des résultats optimaux, commencez par calculer votre Tm avec précision à l’aide de notre calculatrice de Tm.
Méthode d'amplification exponentielle robuste et fiable
Aucune exigence particulière (concernant des vecteurs spéciaux, des sites de restriction ou un état de méthylation donné) pour le plasmide cible
Destruction du modèle de départ au cours d'une étape distincte non nécessaire
L’ADN polymérase haute fidélité Phusion Hot Start II réduit au maximum les mutations secondaires indésirables.
Amplification des plasmides de grande taille (jusqu’à 10 kb)
Grâce à la modification du démarrage à chaud, la polymérase empêche l’amplification des produits non spécifiques et la dégradation indésirable des amorces avant le premier cycle de PCR.
Ligase d’ADN T4 fournie dans le kit ; aucune étape de purification nécessaire avant ou après la ligation
Cellules compétentes DH10BCellules E. coli chimiquement compétentes à haute efficacitéLa souche DH10B convient au clonage de l’ADN contenant de la méthylcytosine et de la méthyladénine, permettant ainsi de cloner efficacement l’ADN génomique procaryote et eucaryote.Ces cellules sont idéales pour la construction de bibliothèques d’ADNc à l’aide de vecteurs dérivés de plasmides.Génotype : F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG
Cellules E. coli chimiquement compétentes à haute efficacité
La souche DH10B convient au clonage de l’ADN contenant de la méthylcytosine et de la méthyladénine, permettant ainsi de cloner efficacement l’ADN génomique procaryote et eucaryote.
Ces cellules sont idéales pour la construction de bibliothèques d’ADNc à l’aide de vecteurs dérivés de plasmides.
Caractéristiques techniques
Marque
Thermo Scientific
Réf. B-LABO
BL-RE-087222
Réf. fabricant
16471595
Type de cellule
DH10B
Contenu et stockage
<b>Boîte 1</b><br>• 10 cellules compétentes DH10B, 100 µl<br>• d’ADN pUC19, 50 µl, 100 pg / µl<br>• de milieu S.O.C., 5 ml<br>Conserver à -80°C.<br><br><b>Boîte 2</b><br>• ADN polymérase Phire Hot Start II, 10 µl, 2 U / µl<br>• tampon HF Phusion (5X), 1,5 ml<br>• mélange dNTP, 10 mM chacun, 20 µl<br>• FastDigest DpnI, 20 µl<br>• plasmide de contrôle (dans un tampon TE), 5 ng / µl<br>• mélange d’amorces de contrôle (25 μM chacun, amorces phosphorylatées 5’), 20 µl<br>• ligase ADN T4, 15 µl<br>• tampon de ligation rapide (5X), 200 µl<br>Conserver à -20°C.
Format
Kit
Type d’échantillon
Produits de PCR
Efficacité
≥ 1 x 10^9
Enzymes
Maxima H Minus
À utiliser avec (application)
Mutagénèse
Capacité de mutagénèse
Mutagenèse sur site unique
Gamme de produits
Phusion, Thermo Scientific™
Type de produit
Kit de mutagenèse dirigée contre le site
Quantité
20 réactions
Conditions d’expédition
Glace carbonique
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