Isolement de l’ARN et des protéines natives à partir du même échantillon
Contenu et stockage
Conserver le tampon de perturbation cellulaire, le tampon de fractionnement cellulaire, la solution de liaison ⁄ lyse 2X, la solution de lavage 1, le concentrat de solution de lavage 2 ⁄ 3 et la solution de précipitation de chlorure de lithium à 4°C. Conserver les cartouches de filtre, les tubes de prélèvement et la solution d’élution à température ambiante.
Le système Invitrogen PARIS™ est destiné à l’isolement de l’ARN et des protéines natives à partir du même échantillon expérimental. Le kit permet également la séparation des fractions nucléaires et cytoplasmiques avant l’isolement de l’ARN et/ou des protéines. Le kit contient suffisamment de réactifs pour 50 purifications de 1 à 75 mg de tissu ou de 100 à 107 cellules chacune.L’isolement de l’ARN de haute qualité est la première étape d’une variété d’analyses d’expression génétique. Très souvent, des études complémentaires au niveau des protéines sont également nécessaires. Généralement, ces analyses sont effectuées à l’aide de différentes aliquotes du même échantillon expérimental. Cependant, en travaillant avec des échantillons rares, difficiles à obtenir ou très petits, il est parfois peu pratique d’isoler indépendamment l’ARN et les protéines natives. Dans les études impliquant un grand nombre d’échantillons, des réactifs coûteux ou une variabilité inhérente (p. ex., transfection cellulaire), l’ajout d’échantillons expérimentaux indépendants est non seulement coûteux et chronophage, mais peut également entraîner des résultats incohérents. Le système d’isolement de protéines et d’ARN (système PARIS) a été développé pour résoudre ces problèmes. Il permet l’isolement de l’ARN et des protéines à partir du même échantillon expérimental. Grâce au système PARIS, l’ARN et les protéines peuvent être isolés simultanément à partir de lysats cellulaires entiers. Sinon, l’ARN et les protéines peuvent également être isolés à partir de fractions nucléaires et cytoplasmiques distinctes. Les tissus ou les cellules cultivées sont d’abord homogénéisés dans un tampon de perturbation cellulaire à froid pour préparer un lysat cellulaire total. L’homogénéisation étant effectuée rapidement sur la glace et en présence de détergent, la protéine et l’ARN peuvent être purifiés directement à partir de ce lysat. Pour l’isolement de l’ARN, une partie du lysat cellulaire total est immédiatement mélangée avec un volume égal de solution de lyse/liaison. L’ARN total est ensuite purifié à partir du mélange à l’aide d’un filtre en fibre de verre de liaison à l’ARN. Après trois étapes de lavage rapides, l’ARN de haute qualité est élué sous une forme concentrée. Cette procédure peut être entièrement réalisée en moins de 20 minutes. Remarque : Ce kit n’est pas recommandé pour les tissus présentant des niveaux élevés de ribonucléases, comme le pancréas.Compatible avec la plupart des applications en aval L’ARN isolé à partir de fractions totales, nucléaires ou cytoplasmiques avec la procédure PARIS peut être utilisé dans diverses applications en aval, notamment l’hybridation de transfert, la translation in vitro, la synthèse de l’ADNc et la RT-PCR. Un traitement DNase I est recommandé pour l’ARN qui sera utilisé pour les expériences PCR en temps réel. Les fractions protéiques peuvent être utilisées directement pour la plupart des applications courantes, notamment les dosages fonctionnels, l’immunoprécipitation, le Western blotting ou l’électrophorèse sur gel bidimensionnelle.
Produits accessoires : Les réactifs de traitement et d’élimination de DNase TURBO DNA-free™ ou DNA-free (n° de cat. AM1907 et AM1906, respectivement) sont idéaux pour éliminer rapidement les traces d’ADN des échantillons d’ARN total et nucléaire sans extraction de phénol ni précipitation d’alcool. La fraction d’ARN cytoplasmique est pratiquement exempte de contamination par l’ADN.
Non compatible avec des cadences élevées (manuel)
Analyse et purification de la lyse cellulaire, de l’ADN et de l’ARN, préparation d’échantillons de protéines et purification de protéines, protéines, expression, isolement et analyse, extraction d’ARN, purification d’acides nucléiques spécialisés (p. ex. acides nucléiques totaux), isolement total de l’ARN, ARN total des cellules et tissus animaux
Points forts
Informations sur la commande
Conditions d’expédition : Température ambiante
Caractéristiques principales
Procédure simple et rapide
Isolez l’ARN et les protéines nucléaires et cytoplasmiques des cellules cultivées
Isolez l’ARN total et les protéines des cellules ou des tissus cultivés
Pas d’extraction de phénol ou de précipitation d’alcool
Réduit le temps, le coût et la variabilité entre les échantillons expérimentaux indépendants
Caractéristiques techniques
Marque
Invitrogen
Réf. B-LABO
BL-RE-089958
Réf. fabricant
10404794
Contenu et stockage
Conserver le tampon de perturbation cellulaire, le tampon de fractionnement cellulaire, la solution de liaison ⁄ lyse 2X, la solution de lavage 1, le concentrat de solution de lavage 2 ⁄ 3 et la solution de précipitation de chlorure de lithium à 4°C. Conserver les cartouches de filtre, les tubes de prélèvement et la solution d’élution à température ambiante.
ARN total, protéines (natives) (fractions nucléaire et cytoplasmique), ARN total (fractions nucléaire et cytoplasmique), protéines (natives)
Compatibilité à haut débit
Non compatible avec des cadences élevées (manuel)
À utiliser avec (application)
PCR quantitative en temps réel (qPCR), PCR de transcriptase inverse (RT-PCR), transfert Western, transcription in vitro, transfert Northern, construction de bibliothèques d’ADNc
Quantité
50 Preps
Conditions d’expédition
Température ambiante
Quantité de matériel de démarrage
Jusqu’à 10^7 cellules, jusqu’à 75 mg de tissu
Rendement
≤1 μg per 10<sup>5</sup> cells<br>≤10 μg per 1 mg tissue
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