Déterminez l’activité totale de la protéase dans les échantillons biologiques par détection fluorescente ou colorimétrique en mesurant la digestion du substrat de caséine marqué.
Contenu et stockage
Dès réception, stocker la caséine-FTC à 4°C. Produit expédié à température ambiante.
Doser
Substrat
Méthode de détection
Fluorescent
Format du kit d’immunoessai
Plaque 96 puits
Type d’étiquette
Colorant classique
Marque
Thermo Scientific
Les kits de dosage des protéases Thermo Scientific™ Pierce mesurent l’activité protéase totale dans des échantillons, ce qui permet d’évaluer l’évolution des procédures d’isolement des protéases ou de quantifier la contamination par des protéases dans des échantillons biologiques.
Ces kits de dosage des protéases par colorimétrie et fluorescence permettent de mesurer l'activité protéase totale dans des échantillons biologiques par deux méthodes différentes. Les deux kits peuvent être utilisés pour évaluer l'évolution des procédures d'isolement des protéases ou pour quantifier la contamination par des protéases dans des échantillons biologiques. Le substrat de protéase de ces kits est une caséine succinylée ou marquée par la fluorescéine. La protéolyse du substrat génère des peptides dont les groupes amino ou les propriétés de fluorescence altérées permettent la détection dans les kits respectifs. L'activité protéase est quantifiée par une comparaison avec un étalon de trypsine inclus dans chaque kit.
Points forts
Points clés
Le substrat du kit de dosage des protéases par colorimétrie (N° Réf. 23263) est une caséine totalement succinylée. En présence de protéases, l'hydrolyse de ce substrat entraîne la libération de fragments peptidiques comportant des groupes amino-terminaux libres. Ces peptides sont mis en réaction avec de l'acide trinitrobenzène sulfonique (TNBSA), suivi par une mesure de l'augmentation de l'absorbance découlant de la formation d'adduits TNB-peptide de couleur jaune.
Le substrat du kit de dosage des protéases par fluorescence (N° Réf. 23266) est une caséine marquée par la fluorescéine qui permet d’évaluer l’activité protéase dans un échantillon par deux méthodes : le transfert d’énergie de fluorescence par résonance (FRET) avec un fluorimètre standard ou la polarisation de fluorescence (FP) avec un instrument spécifique. La caséine-FITC est une caséine native qui a été marquée en utilisant un large excès molaire d'isothiocyanate de fluorescéine (FITC). Les propriétés de fluorescence de ce substrat protéique intact, fortement marqué, sont considérablement modifiées suite à une digestion par des protéases, ce qui offre une indication mesurable de la protéolyse.
Substrat de caséine : mesure l’activité de toute protéase qui clive la caséine en fragments de peptides
Étalon de trypsine : quantifie l’activité de la protéase par rapport à la trypsine, une référence universellement acceptée
Sensible : 1 000 fois plus sensible que les dosages qui utilisent des formes de caséine non modifiées
Simple et rapide : les protocoles en tube à essai ou sur microplaque sont réalisés en moins d’une heure
Homogène : étapes d’addition uniquement ; aucune étape de séparation, de transfert ou d’interruption n’est requise
Personnalisable : la durée, la température et le pH peuvent être facilement adaptés afin d’optimiser la sensibilité exigée par des protéases d’intérêt
Comprend
Caséine modifiée, étalon de trypsine et solution saline tamponnée au Tris (les deux kits) ; solution de TNBSA (N° Réf. 23263 uniquement)
Recommandées dans les cas suivants
Évaluation de l’intégrité fonctionnelle et de l’évolution globale de la purification des protéases ; Quantification de la contamination d’échantillons protéiques par les protéases ; Caractérisation de l’activité de protéases inhabituelles par comparaison à la trypsine ; Évaluation des conditions tampon pour identifier leurs effets sur la fonction et l’activité des protéases
Caractéristiques techniques
Marque
Thermo Scientific
Réf. B-LABO
BL-RE-102044
Réf. fabricant
11861355
Contenu et stockage
Dès réception, stocker la caséine-FTC à 4°C. Produit expédié à température ambiante.
Doser
Substrat
Méthode de détection
Fluorescent
Format du kit d’immunoessai
Plaque 96 puits
Type d’étiquette
Colorant classique
Gamme de produits
Pierce™
Type de produit
Dosage d’activité des protéines
Substrat
Caséine-FITC
Propriétés du substrat
Substrat à base de protéines
Type de substrat
Substrat à base de protéase
À utiliser avec (application)
Polarisation par fluorescence, FRET
À utiliser avec (équipement)
Lecteur de microplaques
Quantité
2,5 mg
Cible
Protéases
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