Un système perfectionné de sélection positive pour un clonage extrêmement efficace de produits PCR générés avec tout ADN polymérase thermostable. Tout fragment d’ADN à extrémités franches ou adhérentes peut être cloné.
Contenu et stockage
Glace sèche (-80°C)
Description
Souche bactérienne / de levure : DH10B
À utiliser avec (application)
Clonage (PCR aux extrémités tronquées, enzyme de restriction / MCS)
Nbre de réactions
20
Marque
Thermo Scientific
kit de clonage par PCR CloneJETUn système perfectionné de sélection positive pour un clonage extrêmement efficace des produits de la PCR générés avec tout ADN polymérase thermostable. Tout fragment d’ADN à extrémités franches ou adhérentes peut être cloné. Le kit fonctionne bien avec des fragments d’ADN phosphorylés et non phosphorylés. La ligature dans le vecteur de sélection positive inclus ne prend que cinq minutes, et son rendement est de plus de 99 % de clones recombinants. Les produits PCR à extrémités franches générés avec une enzyme corrective sont ligaturés directement dans le vecteur de clonage.
Les produits PCR générés soit avec des ADN polymérases sans activité corrective soit avec des mélanges d’ADN polymérases doivent être débarrassés des extrémités avant la ligature dans une réaction de cinq minutes grâce à l’enzyme de coupe franche d’ADN, thermostable, fournie avec le kit. Les cellules compétentes DH10B sont optimisées pour une utilisation avec ce kit et peuvent être transformées directement avec le produit de ligature.
Contient le nouveau vecteur de clonage à sélection positive prêt à l’emploi pJET1.2/blunt. Le vecteur contient un gène d’enzyme de restriction létale qui est perturbé par ligature d’un insert d’ADN dans le site de clonage. Résultat : seules les cellules bactériennes avec plasmides recombinants sont capables de former des colonies. Les molécules re-circularisées du vecteur pJET1.2/blunt auxquelles il manque un insert expriment une enzyme de restriction létale qui tue la cellule E. coli hôte après transformation. Cette sélection positive accélère de façon radicale le processus d’analyse des colonies et élimine les coûts supplémentaires liés à la sélection bleu / blanc.
Points forts
Applications
Cellules compétentes DH10BHaute efficacité, cellules E. coli chimiquement compétentes. La souche DH10B convient au clonage de l’ADN contenant de la méthylcytosine et de la méthyladénine, permettant à la fois de cloner efficacement l’ADN génomique procaryotique et eucaryotique Ces cellules sont idéales pour la construction de bibliothèques d’ADNc à l’aide de vecteurs dérivés de plasmides. Génotype : F – mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ – rpsL(StrR) nupG.
Clonage de produits PCR à extrémité franche ou à extrémité 3’ dA jusqu’à 10 kb
Clonage de fragments d’ADN générés par des enzymes de restriction
Séquençage d’ADN cloné
Transcription in vitro et in vivo d’inserts clonés à partir du promoteur T7
Haute efficacité de transformation : >1x109 cfu/µg d’ADN pUC19
Convient aux applications de clonage courantes et à haut débit
Caractéristiques principales
Ce pack comprend le kit de clonage par PCR CloneJET (20 ou 40 réactions) et les cellules compétentes DH10B optimisées pour une utilisation avec le kit et pouvant être directement transformées avec le produit de ligature
Rapide : clonage par PCR en cinq minutes seulement
Efficacité maximale : 99 % de clones positifs
Pas de bruit de fond de clonage : vecteur à sélection positive
Polyvalent : idéal pour le clonage des extrémités franches ou adhérentes
Économique : pas de sélection coûteuse de bleu / blanc
Caractéristiques techniques
Marque
Thermo Scientific
Réf. B-LABO
BL-RE-087203
Réf. fabricant
16498299
Contenu et stockage
Glace sèche (-80°C)
À utiliser avec (application)
Clonage (PCR aux extrémités tronquées, enzyme de restriction / MCS)
Nbre de réactions
20
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