Le kit Express est conçu pour une croissance et une transfection efficaces des cellules DG44 ovariennes de hamster (CHO) déficientes en dihydrofolate réductase (DHFR) dans une culture en suspension.
Méthode de clonage
Topo™-TA
Système constitutif ou inductible
Constitutive
Type de livraison
Transfection
Format
Kit
À utiliser avec (application)
Clonage
Marque
Gibco
Caractéristiques principales
Le kit OptiCHO™ Express est conçu pour une croissance et une transfection efficaces des cellules DG44 ovariennes de hamster (CHO) déficientes en dihydrofolate réductase (DHFR) dans une culture en suspension.
Le kit fournit un protocole de flux de travaux complet ainsi que les composants nécessaires pour une transfection efficace des cellules DHFR DG44 dans un environnement sans sérum et un développement de lignées cellulaires stables ultérieur, notamment :
Vecteur pOptiVEC™-TOPO™ - vecteur de clonage bicistronique contenant un gène DHFR pour le développement de lignées cellulaires stables dans les cellules CHO-DG44 (Figure 1) ; le vecteur est adapté TOPO™ et permet le clonage d’un produit PCR contenant votre gène d’intérêt avec une efficacité de >85 %
Réactif de transfection Freestyle™ MAX - réactif de transfection sans composants d’origine animale offrant une grande efficacité de transfection et des résultats cohérents
Milieu CD OptiCHO™ - un milieu chimiquement défini et exempt de protéines (sans hypoxanthine ou thymidine) spécialement conçu pour la culture cellulaire en suspension à haute densité de cellules CHO-DG44 recombinantes et le rendement en termes de protéines sécrétées
Milieu CD DG44 - un milieu chimiquement défini, exempt de protéines, supplémenté par de l’hypoxanthine et de la thymidine pour favroriser la croissance optimale des cellules DG44 dans une culture en suspension
Cellules DG44 - préadaptées au milieu CD DG44 et sélectionnées pour une croissance cellulaire et une transfection supérieures
En outre, le kit OptiCHO™ Express fournit le SFM GIBCO™ OptiPRO™ pour une formation améliorée des complexes ADN-lipides, la L-glutamine (fournie séparément pour une stabilité accrue des milieux) et le Pluronic™ F-68 pour contrôler les forces de cisaillement dans les cultures en suspension.
Stockage : Conserver le Pluronic™ F-68 entre 15°C et 30°C. Conserver le milieu CD DG44, le SFM OptiPRO™, le milieu CD OptiCHO™ et le réactif de transfection FreeStyle™ MAX entre 2°C et 8°C dans l’obscurité. Conserver la L-glutamine, le vecteur pOptiVEC™-TOPO™, l’amorce de séquençage sens CMV et l’amorce de séquençage antisens EMCV IRES entre -5°C et -20°C. Conserver les cellules E. coli chimiquement compétentes One Shot™ TOP10 à -80°C. Conserver les cellules DG44 dans de l’azote liquide.
Caractéristiques techniques
Marque
Gibco
Réf. B-LABO
BL-RE-087227
Réf. fabricant
10317963
Méthode de clonage
Topo™-TA
Système constitutif ou inductible
Constitutive
Type de livraison
Transfection
Format
Kit
À utiliser avec (application)
Clonage
Principales fonctions
Production de protéines, développement de lignées cellulaires stables
Gamme de produits
Gibco™
Type de produit
Kit de clonage
Accélérateur
CMV
Marqueur de protéine
Non marqué
Quantité
1 kit
Agent de sélection (eucaryotique)
Milieux HT (-), MTX (méthotrexate)
Vecteur
Vecteurs TOPO-TA
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