Permet une stratégie de clonage très efficace en une seule étape et en 5 minutes (“Clonage TOPO”) pour l’insertion directe de produits PCR amplifiés par polymérase Taq dans un vecteur plasmidique à des fins de séquençage
Souche bactérienne ou de levures
DH5α
Méthode de clonage
TOPO™-TA
Contenu et stockage
Boîte 1 : • Vecteur pCR4-TOPO™ activé par topoisomérase I • Tampon PCR • Solution saline • dNTPs • Modèle de contrôle • Amorces directes T3, T7, M13 et inversées M13 • amorces pour PCR de contrôle • Eau stérile
Stockez de -5 à -30°C. Tous les réactifs sont stables pendant 6 mois lorsqu’ils sont correctement stockés.
Encadré 2 : • Cellules d’E. coli chimiquement compétentes One Shot™ ou Electrocomp™ • Milieu S.O.C. • Plasmide de contrôle pUC19 superenroulé
Stockez entre -68 et -85°C.
Format
Kit
À utiliser avec (application)
Biologie de la chromatine
Marque
Invitrogen
Ces kits incluent tout ce qui est nécessaire pour cloner et sélectionner des vecteurs recombinants contenant le fragment de PCR de votre choix. Chaque kit utilise le vecteur TA pCR4-TOPO avec des sites d’amorce de séquençage spécialement conçus qui donnent plus de séquence d’insertion et moins de séquence de vecteur pour chaque réaction. Vecteur TA pCR4-TOPO : Optimisé pour le séquençageNous avons éliminé la majeure partie du site de clonage multiple du vecteur TA pCR4- TOPO pour raccourcir la distance entre les sites d’amorce de séquençage et le site d’insertion à une valeur aussi faible que 33 bp. Résultat : les réactions de séquençage diminuent la séquence de vecteur et augmentent celle de l’insertion. Le vecteur TA pCR4-TOPO comprend des sites pour quatre amorces de séquençage communes : M13 direct, M13 inverse, T7 et T3. Les kits incluent une aliquote de chaque.Sélection et manipulation de clones TA pCR4-TOPOLe vecteur TA pCR4-TOPO contient à la fois des Marquages de résistance à l’ampicilline et à la kanamycine et une fusion de gènes LacZα-ccdB pour une sélection positive et une sélection bleu/blanc. Le site de clonage multiple minimisé du vecteur inclut toujours des sites EcoRI de flanquement pour l’excision simplifiée des produits de PCR clonés et un site Sse8387I unique pour la génération des suppressions imbriquées avant le séquençage. Les promoteurs T7 et T3 sont également présents pour la transcription in vitro.Clonage simplifié basé sur TOPOGrâce à la technologie de clonage TOPO, il n’est pas nécessaire d’utiliser des amorces pour PCR contenant des séquences spécifiques ou des procédures post-PCR, de préparer les vecteurs ni d’effectuer d’autres étapes de manipulation longues d’ADN. Il suffit d’ajouter votre réaction PCR directement dans le vecteur chargé en topoisomérase, d’incuber pendant 5 minutes et de la transformer avec les cellules compétentes E. coli fournies.Clonage efficaceAvec jusqu’à 95 % de clones porteurs de l’insert désiré, vous n’avez plus besoin d’analyser autant de clones, ce qui vous permet de gagner du temps et de l’argent. Le vecteur TA pCR4-TOPO utilisé dans ce kit est livré avec des saillies de 3’T pour une ligature efficace des produits PCR amplifiés Taq avec des saillies de 3’A.La norme du clonageEn matière de clonage, la technologie de clonage TOPO est un partenaire fiable pour des milliers de scientifiques depuis plus de dix ans. Rapide, simple à utiliser et efficace, le clonage TOPO a été appliqué à de nombreux vecteurs différents pour un large éventail d’applications.Kits de séquençage TOPO TA Cloning - Options de kitLe kit de séquençage TOPO TA Cloning peut être acheté avec diverses cellules compétentes offrant différents avantages selon vos besoins :
Une version du kit qui inclut un kit de minipréparation d’ADN plasmidique rapide PureLink™ (No de catalogue K4575-02) à utiliser pour l’isolement de plasmide recombinant propre et prêt pour le séquençage est également disponible.
Points forts
Kits TOPO TA Cloning pour séquençage - Présentation des kits
Biologie de la chromatine, immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), clonage, analyse de la méthylation, clonage PCR, ARNi, recherche sur l’épigénétique et l’ARN non codant, séquençage de l’ADN traité par bisulfite
VECTEUR : vecteur TA pCR4-TOPO : Vecteur de clonage optimisé pour des résultats de séquençage améliorés
Méthode de clonage : TOPO TA Cloning : topoisomérase I, ligature en 5 minutes des produits PCR avec des saillies de 3’A (amplification Taq) sur le vecteur
Cellules compétentes : Plusieurs options : faites votre choix parmi les kits qui proposent des cellules compétentes générales, à efficacité élevée, résistantes au bactériophage T1 ou à croissance rapide
Caractéristiques principales
Clonage général : TOP10 (No de catalogue K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
Clonage haute efficacité : Cellules ™ TOP10 Electrocomp (No de catalogue K4580-01, K4580-40)
Clonage général, résistance aux bactériophages T1 : DH5α-T1R (No de catalogue K4595-01, K4595-40)
Croissance rapide : Mach1™-T1R chimiquement compétente E. Coli (No de catalogue K4530-20)
Obtenez plus de séquences : permet d’augmenter la séquence d’insert et de réduire la séquence de vecteur lors de l’utilisation d’amorces de séquençage standard
Simplicité et rapidité : passez de la PCR aux clones en trois étapes en un temps de manipulation inférieur à 5 minutes
Efficacité : obtenez jusqu’à 95 % de clones avec le bon insert
Résultats prouvés : performances fiables pendant plus d’une décennie avec plus de 4 000 citations
Caractéristiques techniques
Marque
Invitrogen
Réf. B-LABO
BL-RE-087255
Réf. fabricant
10104512
Souche bactérienne ou de levures
DH5α
Méthode de clonage
TOPO™-TA
Contenu et stockage
<b>Boîte 1 :</b><br>• Vecteur pCR4-TOPO™ activé par topoisomérase I<br>• Tampon PCR <br>• Solution saline<br>• dNTPs<br>• Modèle de contrôle<br>• Amorces directes T3, T7, M13 et inversées M13<br>• amorces pour PCR de contrôle<br>• Eau stérile<br><br>Stockez de -5 à -30°C.<br>Tous les réactifs sont stables pendant 6 mois lorsqu’ils sont correctement stockés.<br><br><b>Encadré 2 :</b><br>• Cellules d’<i>E. coli</i> chimiquement compétentes One Shot™ ou Electrocomp™<br>• Milieu S.O.C.<br>• Plasmide de contrôle pUC19 superenroulé<br><br>Stockez entre -68 et -85°C.
Format
Kit
À utiliser avec (application)
Biologie de la chromatine
Gamme de produits
One Shot™
Type de produit
Kit de clonage
Accélérateur
T7, T3
Quantité
25 réactions
Vecteur
Vecteurs de clonage TOPO-TA
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