Tout comme notre kit de première génération de clonage et d’assemblage transparent, le kit de clonage et d’assemblage Seamless PLUS GeneArt™ est un kit complet pour le clonage simultané et directionnel de 1 à 4 fragments de PCR, composés de n’importe quelle séquence, dans n’importe quel vecteur linéarisé, en une seule réaction à température ambiante de 30 minutes ou moins. Cependant, Seamless PLUS offre plusieurs avantages par rapport aux kits précédents :
•
Efficacité accrue : option de clonage préalable pour les fragments de grande taille afin d’augmenter l’efficacité de clonage
•
Constructions plus grandes : créez des constructions jusqu’à 40 kb
•
Polyvalent : vecteur conjugué de grande capacité et de large gamme qui se reproduit dans la plupart des bactéries à Gram négatif
Les améliorations précédentes sont associées avec ces avantages clés partagés par tous les kits de clonage et d’assemblage Seamless GeneArt™ :
•
Rapidité et simplicité : effectuez le clonage de 4 fragments d’ADN maximum, avec la séquence de votre choix et de manière simultanée dans un seul vecteur ; aucune digestion par des enzymes de restriction, ligature ou sites de recombinaison nécessaire
•
Précision et efficacité : conçu pour vous laisser cloner ce que vous voulez, où vous le voulez, dans l’orientation que vous souhaitez tout en obtenant jusqu’à 90 % de clones corrects et ne délaissant aucune séquence supplémentaire
•
Outils gratuits : concevez votre construction finale et vos oligos d’ADN in silico en utilisant notre
outil Web gratuit qui vous guide étape par étape dans l’ensemble de votre projet
•
Flexibilité du vecteur : utilisez notre vecteur linéaire ou un vecteur de votre choix
•
Applications diverses : rationalisez de nombreuses techniques de biologie synthétique et de biologie moléculaire grâce à la combinaison, l’ajout, la suppression ou l’échange rapides de segments d’ADN
Pour le clonage de plus de 4 fragments d’ADN ou pour les molécules finales supérieures à 110 Kb, envisagez le
système d’assemblage génétique de haut niveau GeneArt™.
Création de clonage simple et rapideLe clonage GeneArt™ Seamless PLUS est un processus simple en deux étapes, composé d’un assemblage in vitro, suivi d’une transformation en E. coli One Shot™ DH10B™ T1R SA compétent. Le kit utilise un mélange enzymatique / tampon exclusif pour assembler des fragments d’ADN avec une homologie des extrémités terminales partagée sans séquences supplémentaires ni cicatrices dans la construction finale (“transparent”). L’homologie des extrémités terminales est facilement incorporée par amplification par PCR avec des oligos d’ADN adaptés conçus à l’aide de notre outil web gratuit.
Efficacité, flexibilité et précision du clonageAvec le kit de clonage et d’assemblage GeneArt™ Seamless PLUS, les principaux facteurs qui influent sur l’efficacité du clonage sont la taille des fragments d’ADN (100 bp à 10 Kb), la taille totale de la molécule finale (≤40 Kb) ainsi que la qualité et la spécificité de chaque fragment.
Efficacité typique du clonage pour différents nombres de fragments :
• >95 % pour 4 fragments, 5 Kb chacun
• >90 % pour 4 fragments, 10 Kb chacun
Le succès du clonage ne dépend pas de la séquence d’inserts ni du type de vecteur, ce qui vous permet de concevoir et d’ajouter presque n’importe quelle séquence, ou combinaison de séquences, souhaitée à n’importe quel plasmide tant qu’elle peut être linéarisée par une digestion par enzymes de restriction ou par PCR. Les clones circularisés obtenus à partir de la réaction ne contiennent que la séquence de votre vecteur d’origine, des inserts, les homologies désignées, sans insertions de nucléotides étrangères.
Assistance de conception in silicoUne étape clé du clonage GeneArt™ Seamless PLUS est la conception correcte des fragments et des oligos avec une homologie et un espacement adaptés, ce qui contribue au succès de l’assemblage de votre clone. Nous proposons un outil en ligne gratuit, l
’outil de conception pour l’assemblage et la mutagenèse transparente ou de haut niveau GeneArt™ qui vous aidera à concevoir vos expériences in silico. L’outil vérifie la compatibilité de la conception expérimentale avec les spécifications du produit, conçoit des oligos d’ADN avec une homologie des extrémités terminales pour l’amplification par PCR des différents éléments à cloner, et présente à l’utilisateur une représentation graphique du vecteur, ainsi qu’une séquence annotée téléchargeable au format GenBank et compatible avec le logiciel Vector NTI™.
Applications™ Le kit de clonage et d’assemblage GeneArt Seamless PLUS est conçu pour permettre le clonage et l’assemblage d’ADN dans un large éventail d’applications de biologie moléculaire et de biologie synthétique, entre autres. Ce produit permet de créer des vecteurs d’expression modulaires, avec des éléments interchangeables, et peut être utilisé pour effectuer une variété d’opérations qui nécessiteraient sinon une multitude d’étapes. Utilisez le kit pour construire des protéines hybrides ; supprimer, remplacer ou ajouter des éléments ADN tels que des sites de restriction dans un vecteur existant ; et exécuter de nombreuses autres techniques qui nécessitent une manipulation de séquences génétiques.
