L’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est une méthode efficace pour produire du baculovirus pour l’expression de protéines de haut niveau dans les cellules d’insectes. Elle repose sur la génération de virus recombinant par transposition spécifique au site dans l’E. coli plutôt que sur la recombinaison homologue dans les cellules d’insectes. Nouveau : vecteurs pFastBacTOPO™ !
Expression fiable et rapide des protéines
Le système d’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est plus rapide et plus facile que l’expression traditionnelle du baculovirus. De plus, il maintient des niveaux élevés d’expression des protéines. Le Bac-to-Bac™ repose sur la génération de baculovirus recombinant par transposition spécifique au site dans l’E. coli plutôt que sur la recombinaison homologue dans les cellules d’insectes. Le système d’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est très apprécié dans la littérature académique. Il fait l’objet d’environ 100 citations par an depuis 2000 !
Les systèmes traditionnels de baculovirus nécessitent la purification et l’amplification d’un surnageant viral initial à faible titre. Cela nécessite un dosage sur plaque chronophage. Cependant, le vecteur pFastBac™ de Bac-to-Bac™ se recombine avec le bacmide parent dans les cellules compétentes E. coli DH10Bac™ pour former un bacmide d’expression. Transfectez le bacmide dans des cellules d’insectes pour une production rapide d’un titre élevé de particules de baculovirus recombinant pur dans la toute première transfection. Vous économiserez des semaines de temps précieux. Collectez un stock de baculovirus P2 pur au 10e jour sans devoir utiliser un dosage sur plaque fastidieux (voir figure 1)
Caractéristiques techniques
| Marque | Invitrogen |
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| Réf. B-LABO | BL-RE-087367 |
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| Réf. fabricant | 10014014 |
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| Résistance aux antibiotiques des bactéries | Ampicilline (AmpR), gentamicine (GMR) |
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| Lignée cellulaire | High Five™, Sf21, Sf9 |
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| Type de cellule | Cellule d’insectes |
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| Méthode de clonage | Blunt TOPO |
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| Contenu et stockage | Contenu du kit pour le kit de clonage Bac-to-Bac™ C-His TOPO™ (pour plus de détails, voir le manuel)<BR>• Kit de vecteur pour 20 réactions de clonage topo :<BR>o pFastBac⁄CT-TOPO™ Vecteur contenant le clivage TEV C-terminal sit et His-Tag. <BR>o Plasmide de contrôle pFastBac⁄CT-Gus (vecteur d’expression de contrôle)<BR>o Autres réactifs fournis : PCR 10x, mélange dNTP, solution saline, eau stérile, gabarit de PCR témoin, amorce sens de polyédrine, amorce antisens SV40 pA<BR>• Kit contenant des cellules compétentes (20 réactions) :<BR>o E. coli One Shot™ Mach1-T1R chimiquement compétent<BR><br>Kit de vecteur : stocker à -20°C<BR>E. coli One Shot™ Mach1-T1R chimiquement compétent : stocker à -80°C<BR> |
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| Mécanisme d’expression | Expression cellulaire d’insectes |
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| Système d’expression | Baculovirus |
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| À utiliser avec (application) | Expression de protéines, production de vaccins viraux |
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| Nbre de réactions | 20 réactions |
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| Gamme de produits | Bac-to-Bac™, TOPO™ |
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| Type de produit | Kit de clonage |
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| Accélérateur | Polyédrine |
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| Marqueur de protéine | “Tag” His (6x) |
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| Quantité | 20 réactions |
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| Agent de sélection (eucaryotique) | Ampicilline, gentamicine |
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| Vecteur | pFastBac/CT-TOPO |
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